載脂蛋白F轉錄調控機制的研究.pdf

1、目的:載脂蛋白F(apolipoprotein F,ApoF)與血脂異常密切相關,本課題主要是研究ApoF的轉錄調控機制。
　　方法:構建ApoF啟動子區(qū)全長及一系列分段克隆,通過熒光素酶報告基因確定上游啟動子關鍵轉錄調控區(qū)。并通過TFSEARCH和TESS軟件預測關鍵轉錄調控區(qū)域潛在的轉錄因子結合位點。此外,通過位點定點突變、轉錄因子及其相應顯性失活突變體過表達、電泳遷移率實驗和染色質免疫共沉淀進一步驗證該區(qū)域的轉錄因子結合位點

2、。
　　結果:1.載脂蛋白F啟動子5‘端上游-198nt~+79nt區(qū)域是保留ApoF啟動子最大活性的關鍵調控區(qū);2.發(fā)現調控ApoF表達的ETS-1、HNF3及C/EBP轉錄因子結合位點;3.ApoF的啟動子活性在肝組織來源的細胞株最高;4.成功構建ETS-1、ETS-2的表達克隆及其相應顯性失活突變體;5.過表達ETS-1及ETS-2增加ApoF的啟動子活性,過表達ETS-1、ETS-2顯性失活突變體抑制ApoF啟動子的活性。