HBV對腎小管上皮細胞的影響及TLR4抑制病毒復制作用的探討.pdf

1、目的：探討乙型肝炎病毒（HBV）感染人近端腎小管上皮細胞系HK2后對其表達TLR4 的影響，觀察TLR4抗HBV感染的生物學作用。
　　 方法：收集HBV-DNA 拷貝在107~108/mL 患者的血清，通過顯微鏡及免疫熒光法觀察HBV 陽性血清感染HK-2 前、后細胞形態(tài)及α抗平滑肌抗體(α-SMA)的變化，應用MTT 法檢測不同濃度TLR4 刺激因子--LPS及TLR4 抑制因子--CLI-095 對HK2 細胞增殖的影響。

2、選取10μg/mL 脂多糖（LPS）及5μg/mL CLI-095 作用于HBV 感染的HK2 細胞，通過細胞免疫熒光法及Western-blotting 法檢測HK2 細胞內(nèi)TLR4 蛋白的變化，ELISA 法和熒光定量PCR 法分別觀測各組細胞上清液中HBsAg、HBeAg和HBV-DNA 含量的變化。
　　 結(jié)果：HBV 分別感染HK2 細胞12h 和24h 后，隨感染時間延長，細胞形態(tài)越不規(guī)則，細胞數(shù)量越少，而α-SMA

3、 的表達水平與感染24h后相比，在HBV 感染12h 后表達最多。HK2 細胞的增殖程度隨著LPS濃度的升高逐漸下降，而CLI-095 濃度對HK2 細胞增殖無顯著影響。LPS濃度在小于10μg/mL 范圍內(nèi)，HBV 感染HK2 細胞24h 后其增殖程度與劑量呈正相關(guān)，與CLI-095 濃度呈負相關(guān)。LPS 組HK2 細胞TLR4 蛋白的表達高于CLI-095 組，其上清液中HBV-DNA 水平及HBsAg、HBeAg表達水平較CLI-