氧化型低密度脂蛋白、白介素-1β致動脈粥樣硬化相關基因的研究.pdf

1、目的：脂質過氧化和炎癥是動脈粥樣硬化發(fā)病機制中的兩大重要假說，在動脈粥樣硬化發(fā)展的不同階段是相互協(xié)同的。氧化型低密度脂蛋白(0x—LDL)是最具有致AS作用的脂質成分，白介素一1B(IL-1B)是在全身和局部炎癥反應中起核心作用的細胞因子。本實驗分別研究0x—LDL和IL-1B對單核／巨噬細胞轉化為泡沫細胞的影響以及基因表達譜的變化，為冠心病的防治探索新思路。 方法：以人前單核白血病細胞株THP—l細胞作為人單核細胞的體外培養(yǎng)模

2、型。以PMA(160nmol／L)48小時誘導其轉變?yōu)榫奘杉毎?。加入Ox-LDL(50ug／mL)72小時，使其轉變?yōu)榕菽毎?。油紅0染色、透射電鏡觀察鑒定細胞內脂質。BiostarH一40s表達譜芯片(含有4096條基因)，檢測Ox-LDL作用后的基因表達差異。巨噬細胞加入IL-1β(10ng／札)72小時，油紅O染色、電鏡觀察鑒定是否能形成泡沫細胞。BiostarH一40s表達譜芯片檢測IL一1β作用后的基因表達差異。 結果

3、：THP一1細胞在PMA作用48小時后，分化為成熟巨噬細胞。再經(jīng)Ox-LDL作用72小時后，油紅0染色提示泡沫細胞形成，透射電鏡可見細胞內脂滴聚集。BiostarH-40s表達譜芯片檢測示Ox-LDL刺激后差異表達3倍以上的基因共87條，其中下調共58條。上調共29條。主要涉及脂代謝有關的基因，啟動和加重炎癥的基因，細胞凋亡有關的基因以及損傷應激保護性基因等。巨噬細胞經(jīng)IL一1β作用72小時后，油紅0染色和透射電鏡未提示明顯的泡沫細胞形

4、成。BiostarH-40s表達譜芯片檢測示IL-1β刺激后差異表達3倍以上的基因共14條，其中下調9條。上調5條。主要涉及細胞凋亡，脂代謝，損傷應激等基因。在差異表達3倍的水平，0x—LDL和IL一1β刺激引起的基因表達差異沒有重疊部分。 結論：0x—LDL可使THP一1細胞成功轉變成泡沫細胞，而單獨IL-1β刺激未能使THP-1細胞轉變成泡沫細胞?；蛐酒夹g能大規(guī)模、高通量地平行檢測不同樣品基因表達差異。本研究檢測結果提示