MiR-146a-5p促進APTG-CM誘導的PDLSCs向成骨細胞分化的功能研究.pdf

1、正畸治療過程中，常常發(fā)生患者口腔衛(wèi)生情況不佳導致的牙槽骨吸收，牙槽骨作為牙周組織，借助牙周膜纖維與牙齒緊密相連，在維持牙齒的穩(wěn)定和行使正常生理功能上發(fā)揮著重要作用。在臨床上發(fā)現，由于牙周疾病或者正畸力量過大，往往導致牙槽骨吸收。人牙周韌帶中存在有牙周膜干細胞（periodontal ligament stem cells，PDLSCs)，其具有自我增殖和多向分化潛能，可作為組織工程最直接可靠的種子細胞。研究表明，hPDLSCs在不同的培

2、養(yǎng)環(huán)境和細胞因子的作用下，可不斷增殖分化成為成骨細胞、成牙骨質細胞和成纖維細胞；其可修復牙周缺損，使牙周組織再生。MicroRNA在間充質干細胞向成骨細胞分化過程中起著重要作用。hPDLSCs屬于間充質干細胞，具有多向分化潛能，然而在hPDLSCs向成骨細胞方向分化過程中，hsa-miR-146a是否起到了重要的調控作用尚未得知。
　　目的：
　　為了研究在特定體外微環(huán)境中人牙周膜干細胞向成骨細胞方向分化過程中miR46a-

3、5p是否發(fā)揮調控作用，從而為牙槽骨的再生及發(fā)育機制提供基礎性研究。
　　實驗方法：
　　本實驗首先構建慢病毒特異性上/下調miR146a-5p，進而通過由根端牙胚細胞(Apical Tooth germ cells，APTGC)構成的體外微環(huán)境誘導hPDLSCs向成骨細胞方向分化，對誘導前后的hPDLSCs進行堿性磷酸酶（Alkaline Phosphatase，ALP）活性檢測以及成骨相關基因：（ALP、BSP及OCN）檢

4、測。
　　1. hPDLSCs的體外培養(yǎng)和篩選;
　　2. APTG誘導培養(yǎng)基的制備;
　　3. RT-QPCR驗證miR146a-5p表達差異;
　　4.慢病毒轉染hPDLSCs;
　　5. ALP活性檢測;
　　6. Real-timePCR檢測特異性上/下調miR146a-5p后成骨相關基因：（ALP、BSP及OCN）的變化。
　　實驗結果：
　　1.通過免疫磁珠法篩選獲得hPDLS

5、Cs。
　　2.RT-QPCR檢測驗證miR146a-5p在hPDLSCs向成骨細胞方向分化過程中表達增高。
　　3.慢病毒特異性轉染效率檢測顯示 LV-has-miR146a-5p及LV-has-miR146a-5pinhibitor導入人牙周膜干細胞后其miR146a-5p特異性表達為上調及下調。
　　4.ALP活性檢測顯示，LV-has-miR146a-5p上調組細胞ALP活性較對照組有顯著升高，LV-has-m