MiR-146a-5p促進(jìn)APTG-CM誘導(dǎo)的PDLSCs向成骨細(xì)胞分化的功能研究.pdf

1、正畸治療過(guò)程中，常常發(fā)生患者口腔衛(wèi)生情況不佳導(dǎo)致的牙槽骨吸收，牙槽骨作為牙周組織，借助牙周膜纖維與牙齒緊密相連，在維持牙齒的穩(wěn)定和行使正常生理功能上發(fā)揮著重要作用。在臨床上發(fā)現(xiàn)，由于牙周疾病或者正畸力量過(guò)大，往往導(dǎo)致牙槽骨吸收。人牙周韌帶中存在有牙周膜干細(xì)胞（periodontal ligament stem cells，PDLSCs)，其具有自我增殖和多向分化潛能，可作為組織工程最直接可靠的種子細(xì)胞。研究表明，hPDLSCs在不同的培

2、養(yǎng)環(huán)境和細(xì)胞因子的作用下，可不斷增殖分化成為成骨細(xì)胞、成牙骨質(zhì)細(xì)胞和成纖維細(xì)胞；其可修復(fù)牙周缺損，使牙周組織再生。MicroRNA在間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化過(guò)程中起著重要作用。hPDLSCs屬于間充質(zhì)干細(xì)胞，具有多向分化潛能，然而在hPDLSCs向成骨細(xì)胞方向分化過(guò)程中，hsa-miR-146a是否起到了重要的調(diào)控作用尚未得知。
　　目的：
　　為了研究在特定體外微環(huán)境中人牙周膜干細(xì)胞向成骨細(xì)胞方向分化過(guò)程中miR46a-

3、5p是否發(fā)揮調(diào)控作用，從而為牙槽骨的再生及發(fā)育機(jī)制提供基礎(chǔ)性研究。
　　實(shí)驗(yàn)方法：
　　本實(shí)驗(yàn)首先構(gòu)建慢病毒特異性上/下調(diào)miR146a-5p，進(jìn)而通過(guò)由根端牙胚細(xì)胞(Apical Tooth germ cells，APTGC)構(gòu)成的體外微環(huán)境誘導(dǎo)hPDLSCs向成骨細(xì)胞方向分化，對(duì)誘導(dǎo)前后的hPDLSCs進(jìn)行堿性磷酸酶（Alkaline Phosphatase，ALP）活性檢測(cè)以及成骨相關(guān)基因：（ALP、BSP及OCN）檢

4、測(cè)。
　　1. hPDLSCs的體外培養(yǎng)和篩選;
　　2. APTG誘導(dǎo)培養(yǎng)基的制備;
　　3. RT-QPCR驗(yàn)證miR146a-5p表達(dá)差異;
　　4.慢病毒轉(zhuǎn)染hPDLSCs;
　　5. ALP活性檢測(cè);
　　6. Real-timePCR檢測(cè)特異性上/下調(diào)miR146a-5p后成骨相關(guān)基因：（ALP、BSP及OCN）的變化。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　1.通過(guò)免疫磁珠法篩選獲得hPDLS

5、Cs。
　　2.RT-QPCR檢測(cè)驗(yàn)證miR146a-5p在hPDLSCs向成骨細(xì)胞方向分化過(guò)程中表達(dá)增高。
　　3.慢病毒特異性轉(zhuǎn)染效率檢測(cè)顯示 LV-has-miR146a-5p及LV-has-miR146a-5pinhibitor導(dǎo)入人牙周膜干細(xì)胞后其miR146a-5p特異性表達(dá)為上調(diào)及下調(diào)。
　　4.ALP活性檢測(cè)顯示，LV-has-miR146a-5p上調(diào)組細(xì)胞ALP活性較對(duì)照組有顯著升高，LV-has-m