雌激素對大鼠急性高眼壓模型中小膠質(zhì)細胞的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:青光眼是臨床最常見致盲眼病之一,發(fā)病機制尚不清楚,其中青光眼免疫學發(fā)病機制逐漸引起人們的關注。視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細胞作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)最具代表性的免疫細胞已成為研究熱點,其視神經(jīng)保護與毒性的雙重作用歸因于它對一系列病變做出反應后所能合成和分泌的物質(zhì)不同,因此針對視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細胞雙重作用的藥物研究成為治療青光眼的切入點。有研究表明雌激素具有免疫細胞凋亡的調(diào)節(jié)作用,亦有視神經(jīng)保護作用,故本實驗通過建立大鼠急性高眼壓模型,觀察雌激素對視網(wǎng)膜小膠

2、質(zhì)細胞的活化、誘導型一氧化碳合酶(iNOS)的表達影響及對視神經(jīng)節(jié)細胞的保護,為今后治療青光眼提供實驗依據(jù)。
   方法:SD大鼠35只雄性(全部采用雄性大鼠的目的是盡量減少內(nèi)源性雌激素對實驗的影響),無眼疾,體重200±20 g,分3組,Ⅰ組即正常組5只(10眼),余30只均采用前房加壓灌注法將左眼制成急性高眼壓模型(以下統(tǒng)稱模型眼),右眼為自身對照眼(以下統(tǒng)稱為自身對照眼),再將這30只分為Ⅱ組即雌激素腹腔注射組15只和Ⅲ組

3、即消毒橄欖油注射組15只。最終棄去實驗中突然卒死及不符合標準的眼球,每組各保留10只眼球固定后行石蠟切片,應用免疫組化技術分析視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細胞的表達(細胞表面標記物為CD11b)及其iNOS的表達,以及視神經(jīng)節(jié)細胞的凋亡。計算機圖像分析軟件對圖像中的陽性反應部位進行光密度分析,三者半定量測定結果均以均數(shù)±標準差(Mean±SD)表示,應用SPSS統(tǒng)計分析軟件進行統(tǒng)計學分析
   結果:1.組織病理學變化:
   1.1C

4、D11b陽性小膠質(zhì)細胞:Ⅰ組可見小膠質(zhì)細胞淡染,呈棕黃色、分枝狀,胞體小,具有伸向各個方向的細小突起。Ⅱ、Ⅲ組模型眼活化的小膠質(zhì)細胞數(shù)量增加,突起變短、變粗,胞體增大、變圓,并聚集于凋亡的節(jié)細胞及細胞碎片周圍。
   1.2視神經(jīng)節(jié)細胞:Ⅰ組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞呈單層排列,無陽性細胞。Ⅱ、Ⅲ組的自身對照眼與Ⅰ組相同。Ⅱ、Ⅲ組的模型眼光鏡下可見視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)目明顯減少,視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞層呈空泡樣改變,部分細胞出現(xiàn)核溶解、核染色淺淡

5、、胞漿染色淺淡。Ⅱ組模型眼視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)目減少,形態(tài)大致正常,神經(jīng)節(jié)細胞層結構基本正常。
   2.小膠質(zhì)細胞免疫組織化學分析(即小膠質(zhì)細胞的活化及iNOS的表達):3組CD11b陽性細胞數(shù)均可檢測到,Ⅰ組未見到iNOS陽性細胞,Ⅱ、Ⅲ組模型眼CD11b陽性細胞及iNOS陽性細胞增多,均高于Ⅰ組及自身對照眼(P<0.05)。Ⅱ組模型眼染色CD11b陽性細胞及iNOS陽性細胞數(shù)少于Ⅲ組模型眼陽性細胞數(shù)(P<0.05)。

6、   3.視神經(jīng)節(jié)細胞TUNEL原位凋亡監(jiān)測:染色陽性的視網(wǎng)膜節(jié)細胞(RGCs)在3組動物眼球上均可檢測到,Ⅰ組及Ⅱ、Ⅲ組的自身對照眼TUNEL,染色陽性的RGCs數(shù)最少。Ⅱ、Ⅲ組模型眼上TUNEL染色陽性的RGCs稍多,陽性細胞數(shù)均高于Ⅰ組及自身對照眼(P<0.05)。Ⅱ組模型眼TUNEL染色陽性細胞數(shù)少于Ⅲ組模型眼陽性細胞數(shù)(P<0.05)。同時證實小膠質(zhì)細胞的活化及其iNOS的表達均與節(jié)細胞凋亡指數(shù)呈正相關。
   結論

7、:
   1.通過分析Ⅱ、Ⅲ組模型眼與Ⅰ組及自身對照眼CD11b及iNOS的表達(P<0.05),證實高眼壓下小膠質(zhì)細胞活化,并表達iNOS。
   2.Ⅱ、Ⅲ組模型眼的CD11b及iNOS表達籌異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),表明雌激素能夠抑制小膠質(zhì)細胞的活化,減少iNOS的表達,從而減少合成NO神經(jīng)毒性物質(zhì)。
   3.NO具有神經(jīng)毒性,。
   4.RGCs的TUNEL檢測表明雌激素能夠減少節(jié)細胞的

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