大鼠局灶性腦缺血再灌注后腦水腫及腦組織5-脂氧合酶表達的動態(tài)觀察.pdf

1、目的：腦血管病(cerebral vascular disease，CVD)是導致人類死亡的三大疾病之一，嚴重影響人類的預期壽命和生活質量，且以缺血性腦血管病最常見。大量研究發(fā)現(xiàn)腦組織的缺血性損傷是多種因素共同作用的結果，包括自由基損傷、興奮性毒性、鈣超載、細胞凋亡、炎癥反應等。腦水腫是腦缺血后一個重要的病理環(huán)節(jié)，可引起并加重繼發(fā)性神經損傷，甚至形成腦疝，危及患者生命，是影響患者急性期生存的重要因素。盡管目前缺血性腦血管病在預防和治療方

2、面取得了一些進展，但其發(fā)生后的腦組織損傷的具體機制還未明確，因而成為臨床和基礎研究的熱點。5-脂氧合酶(5-liDoxygenase，5-LO)是機體催化花生四烯酸生成炎癥介質白三烯的關鍵酶，近年來的研究表明5-LO參與了中樞神經系統(tǒng)缺血后的炎癥反應、外傷性腦損傷、膠質瘤形成、老年退行性病變等病理過程。本研究的目的在于建立穩(wěn)定的大鼠局灶性腦缺血再灌注動物模型，在此基礎上進行行為學評分、測定腦組織含水量的變化規(guī)律、觀察5-LO在腦組織中的

3、動態(tài)表達，進而探討5-LO在缺血再灌注后的腦水腫形成和繼發(fā)性神經損傷中的作用及意義。 方法：采用健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠，參照Longa等的線栓法制作大鼠右側大腦中動脈閉塞(middlecerebral artery occlusion，MCAO)模型，缺血3 h后拔除栓線實現(xiàn)再灌注。假手術對照組不插入栓線。術后6 h、24 h、48 h、72 h對大鼠進行行為學評分，包括Longa評分法(LongaSco

4、re)、Berderson評分法(Berderson Score)、平衡木評分法(Balance Beam Score)。然后將動物斷頭處死，取出完整的腦組織，去除嗅球及額極前部4 mill腦組織，取其后2 mm厚的腦組織用來測量病變同側和病變對側的腦含水量，應用干濕重法測量的計算公式為：(WW-DW)/WW×100％余下的腦組織經4％多聚甲醛固定、酒精梯度脫水、石蠟包埋，冠狀切成5 μm厚的石蠟切片，相鄰組織切片分別用做蘇木精一伊紅染

5、色和免疫組織化學染色。常規(guī)蘇木精．伊紅染色觀察炎細胞浸潤、腦組織水腫、神經元和膠質細胞的改變等病理變化，免疫組化方法觀察不同時間點大鼠腦組織5-LO的表達情況。 結果：①術后6 h各組大鼠的三種行為學評分分值都很高，考慮為藥物麻醉和手術損傷所致，沒有實際意義。24 h開始，評分趨于穩(wěn)定可信。24～72 h缺血再灌注組大鼠的行為學明顯異常，行為學評分分值明顯高于假手術對照組，且以48 h時神經功能缺損最為明顯。②再灌注后6 h病

6、變側腦組織含水量開始升高，但與假手術對照組比較無顯著性差異，P>0.05。24 h明顯升高(82.42±0.118)％，48 h達到高峰(85.40±0.099)％，持續(xù)至72 h，與假手術對照組和病變對側比較，三個時間點均有統(tǒng)計學意義，P<0.05。③再灌注后6 h缺血皮質神經元皺縮呈三角形，神經元細胞核濃染，毛細血管充血擴張，血管內皮細胞腫脹，血管周圍間隙擴大；24 h缺血范圍進一步擴大；48 h缺血腦組織高度腫脹，部分區(qū)域可見不規(guī)

7、則灶片出血；72 h病變周圍出現(xiàn)膠質細胞增生，新生血管形成；6 h可見缺血腦組織有炎細胞浸潤，24 h、48 h浸潤明顯；假手術對照組組織結構完整，未見明顯病理學改變。④5-LO陽性細胞為神經元和神經膠質細胞，且主要表達在缺血區(qū)神經元，光鏡下陽性細胞呈棕黃色。假手術對照組腦組織5-LO陽性細胞數少，再灌注6 h組大鼠缺血腦組織5-LO陽性細胞數增加，24 h時陽性表達至高峰，陽性細胞計數為31.63±3.35，再灌注48 h、72 h時

8、，5-LO陽性細胞數仍維持在一定水平。與假手術對照組比較，術后各時間點均有統(tǒng)計學意義，P<0.05。 結論：本實驗采用線栓法制作的大鼠局灶性腦缺血再灌注模型較為穩(wěn)定、成熟，是腦缺血再灌注基礎研究和治療干預研究較為理想的動物模型。大鼠行為學評分和腦組織含水量隨時間的變化趨勢相一致，說明腦水腫的形成和發(fā)展是造成神經功能缺損的主要原因之一，腦缺血再灌注后5-LO的表達與腦水腫發(fā)生發(fā)展及炎細胞浸潤規(guī)律基本一致，由此提示5-LO參與了缺