轉VEGF內皮細胞株的建立及其對平滑肌細胞增殖的影響.pdf

1、動脈粥樣硬化疾病(AS)屬于心血管疾病中的一個大類，它嚴重影響著人們的健康。冠狀動脈支架植入已是治療該疾病的重要手段。但是支架的植入會再次引發(fā)支架內再狹窄的發(fā)生，目前，抑制血管支架再狹窄的主要途徑是采用藥物洗脫性支架，藥物洗脫支架明顯的降低了再狹窄發(fā)生的概率，但再狹窄的問題仍然無法避免，其原因在于藥物在阻斷血管平滑肌細胞(Vascular Smooth Muscle Cells，VSMCs)增生的同時也抑制了內皮細胞(Endotheli

2、al Cells，ECs)的增殖，進一步延緩了手術后的再內皮化進程，從而導致再狹窄。
　　 血管ECs和VSMCs之間的相互作用是不同心血管疾病發(fā)展的基礎，內皮層血管壁內膜在植入支架的過程中很容易被損壞。血管壁損傷后，VSMCs從靜態(tài)的收縮表型分化為有利于遷移，增殖，最終導致血管再狹窄。因此加速血管內皮化是防止血管再狹窄的可行性措施。
　　 本文通過構建組織工程細胞，用作支架種子細胞，以期種植到支架表面后能以加速ECs的

3、增殖、遷移，促進血管內皮化，以此來抑制VSMCs的增殖，及防止支架再狹窄的發(fā)生。同時利用Transwell共培養(yǎng)模型與大鼠VSMCs進行共培養(yǎng)，從而研究聯(lián)合培養(yǎng)調節(jié)下的穩(wěn)定表達VEGF121的ECs對VSMCs增殖的影響。全文研究結果如下：
　　 ①利用RNA干擾技術構建2種pSilencer3.1-VEGF121-shRNA真核干擾表達載體和一種陰性干擾載體，通過潮霉素篩選穩(wěn)定轉染的細胞，同時復蘇本實驗室保存的可以穩(wěn)定表達的p

4、IRES2-EGFP-VEGF過表達ECs，通過Western blot及RT-PCR檢測種子細胞VEGF蛋白和VEGF基因的表達，同時篩選出抑制效率最高的pSilencer3.1-VEGF121-shRNA2表達質粒，結果證實具有穩(wěn)定表達不同水平VEGF的ECs構建成功。
　　 ②通過MTT法驗證到穩(wěn)定轉染VEGF基因的ECs的增殖速度明顯比對照組和VEGF干擾組快，且細胞的血管形成能力和遷移能力都明顯高于對照組和干擾的細胞，

5、轉VEGF基因的細胞的NO分泌量較對照組與干擾組明顯增加，并采用FITC-Phalloidin對ECs的骨架進行染色，結果發(fā)現(xiàn)VEGF干擾組的細胞質F-肌動蛋白絲和肌動蛋白應力纖維減少，細胞外圍邊緣的F-肌動蛋白也明顯減少，說明血管內皮細胞過表達VEGF可以促進細胞骨架的形成。
　　 ③采用貼壁法成功培養(yǎng)并鑒定出原代大鼠平滑肌細胞，同時利用Transwell共培養(yǎng)系統(tǒng)將ECs與大鼠的VSMCs進行共培養(yǎng)，結果發(fā)現(xiàn)共培養(yǎng)下穩(wěn)定表達