OA護膝防治膝骨性關節(jié)炎的實驗研究.pdf

1、目的：研制OA護膝，并通過觀察OA護膝對骨性關節(jié)炎細胞因子、基質溶解素、透明質酸、氧自由基代謝、關節(jié)軟骨宏微觀結構變化和細胞增殖、凋亡的影響，探討其防治膝骨性關節(jié)炎的機制及療效。 方法：1.OA護膝的研制：根據中醫(yī)“寒者熱之”、“瘀者通之”的治則，以PIC16F630單片機為核心，電路主要由升壓、輸出、單片機控制以及電熱軟膜4部分組成，通過鍵盤設定單片機產生不同幅度和頻率的動態(tài)變頻疏密波進行治療，30min后單片機內部定時器中斷

2、，自動關機。2.實驗研究：日本大耳白兔60只，隨機分為2組，即：正常組(10只)和手術組(50只)。采用改良Hulth法復制膝骨性關節(jié)炎模型，術后隨機分為5組，即模型組、對照組(微波組)、實驗1組(電組)、實驗2組(熱組)、實驗3組(護膝組)，并行對應治療。8周后，分別測定關節(jié)滑液IL-1β、IL-6、TNF—α、MMP-3、HA濃度，及血液MDA、SOD、NO濃度。16周后，分別測定關節(jié)滑液IL—1β、IL-6、TNF—α、MMP-3

3、、HA濃度，關節(jié)滑膜及血液MDA、SOD、NO濃度，并用CR片、光鏡、透射電鏡、Tunel法、PCNA進行組織形態(tài)學觀察，同時用RT—PCR檢測關節(jié)軟骨細胞Bcl-2、P53的mRNA相對表達水平。 結果：1.OA護膝的研制：護膝輸出的疏密波可控制由2～300Hz不同頻率刺激脈沖組成，脈沖寬度在100～150 μs之間，輸出正負向對稱的刺激脈沖，采用可充電的手機電池(3.7V)供電，單片機定時，30min自動關機。電熱軟膜工作時

4、的溫度控制在40℃左右。2.實驗研究：模型組、對照組、實驗1組、實驗2組、實驗3組關節(jié)液中IL-1β、IL-6、TNF—α、MMP-3、血液MDA、NO濃度均高表達，含量16周明顯高于8周時，而關節(jié)液HA和血液SOD濃度均低表達，含量16周明顯低于8周時，16周時關節(jié)滑膜中MDA、NO濃度、關節(jié)軟骨細胞P53的mRNA相對表達水平、AI均呈高表達，而SOD濃度、關節(jié)軟骨細胞Bcl-2的mRNA相對表達水平、PI均低表達，與正常組有顯著性

5、差異(P<0.01，P<0.05)。8周時，關節(jié)液中IL-1β、IL-6、TNF—α、MMP-3、HA，血液中MDA、NO、SOD含量，對照組、實驗1組、實驗2組、實驗3組與模型組有顯著性差異(P<0.01，P<0.05)；對照組、實驗1組、實驗2組與實驗3組有顯著性差異(P<0.05)。16周時，關節(jié)液中IL-1β、IL-6、TNF—α、MMP-3、HA，血液和關節(jié)滑膜中MDA、NO、SOD含量，關節(jié)軟骨細胞Bcl-2、P53的mRN

6、A相對表達水平，AI、PI，對照組、實驗1組、實驗2組、實驗3組與模型組有顯著性差異(P<0.01，P<0.05)：對照組、實驗1組、實驗2組與實驗3組有顯著性差異(P<0.05)。16周時與8周時，關節(jié)液中IL一1β、IL-6、TNF—α、MMP-3、HA，血液中MDA、NO、SOD含量，實驗3組間比較有顯著性差異(P<0.05)。CR片顯示：正常組關節(jié)間隙正常，關節(jié)面平整光滑，無骨贅：模型組內側間隙明顯變窄，有明顯骨贅；光鏡顯示：正

7、常組關節(jié)軟骨四層結構清晰可辨，軟骨細胞排列整齊呈柱狀，染色質分柿均勻，細胞核清晰：模型組關節(jié)軟骨層變薄，部分區(qū)域軟骨細胞核固縮、壞死，軟骨細胞排列紊亂，四層結構不易分辨；電鏡顯示正常組軟骨細胞呈橢圓形，細胞及胞膜完整，包質內可見豐富粗面內質網、高爾基體、線粒體，細胞核完整，染色質分布均勻：模型組軟骨細胞明顯固縮且外形不規(guī)則，細胞周暈消失，胞漿內細胞器凝成高電子密度的片狀物不易分辨，細胞核不規(guī)則，染色質濃聚，散裂于核中：實驗3組內側間隙變

8、窄，關節(jié)邊緣有輕微骨贅，關節(jié)面粗糙變形，軟骨細胞輕度萎縮，核內異染色質增多，胞質內可見脂滴及微絲出現。對照組、實驗1組與實驗2組介于模型組、實驗3組之間。免疫組化觀察結果：正常組、實驗3組、實驗1組、實驗2組、對照組、模型組TUNEL陽性率逐漸增高，PCNA陽性率逐漸降低。結論：1.以PIC16F630單片機為系統控制核心的OA護膝，可通過鍵盤按鈕控制輸出信號的頻率、脈沖寬度、強度和工作時間。2.OA護膝采用低頻溫熱動態(tài)變頻疏密波，針對