草酸-s-西酞普蘭對抑郁癥治療作用機制研究.pdf

1、目的：建立大鼠慢性輕度不可預見性應激加孤養(yǎng)所致慢性應激抑郁模型以及皮質酮誘導PC12細胞模擬抑郁癥時神經(jīng)元損傷的細胞模型，探討草酸-s-西酞普蘭(Escitalopram，ESC)對抑郁癥治療作用機制。 方法：(1)建立慢性輕度不可預見性應激加孤養(yǎng)所致慢性應激抑郁模型，將大鼠篩選后隨機分為模型組、空白對照組及Escitalopram低、中、高劑量組。造模方法要點如下：將禁水(24h)、夾尾(1min)、45℃環(huán)境(5min)、4

2、℃冰水游泳(5min)、晝夜顛倒(24h)、禁食(24h)、電擊足底(電壓50mv，每隔50s刺激1次，每次持續(xù)10s，30次)、居住環(huán)境改變(潮濕墊料、鼠籠傾斜)及限制行為(2h)等刺激隨機安排到18天內，模型組及Escitalopram各組均單獨飼養(yǎng)。在每天實驗前半小時予大鼠灌胃，Escitalopram低劑量、中劑量和高劑量組分別給予灌胃Escitalopram1mg/kg，2mg/kg及4mg/kkg，模型組和空白對照組給予0.

3、9％生理鹽水灌胃，21天后，測定大鼠敞箱實驗和液體消耗實驗等行為學指標變化及測定血漿皮質醇(cortiso，CORT)和促腎上腺皮質激素(adrenocorticotropichormone，ACTH)含量。(2)用免疫組化法分別檢測模型組，空白對照組，Escitalopram各組大鼠磷酸化cAMP反應元件結合蛋白(cAMPresponseelementbindingprotein，CREB)和腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(Brain-deriv

4、edneurotrophicfactor，BDNF)的表達。(3)建立皮質酮誘導PC12細胞模擬抑郁癥的腦神經(jīng)元損傷狀態(tài)細胞模型，分別給予低、中、高劑量Escitalopram(ESC6.25μmol·L-1，ESC12.5μmol·L-1，ESC25μmol·L-1)后，用MTT法檢測細胞的存活率。 結果：(1)慢性輕度不可預見性應激加孤養(yǎng)模型所造成的慢性應激抑郁模型大鼠水平運動得分(11.00±9.445)有所降低，與空白對

5、照組(82.50±5.822)相比，P＜0.01，差異具有統(tǒng)計學意義；垂直運動得分(1.83±1.835)有所降低，與空白對照組(12.67±3.445)相比，P＜0.01，差異具有統(tǒng)計學意義；理毛次數(shù)(1.17±0.983)有所降低，與空白對照組(3.00±0.894)相比，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計學意義；中央格停留時間(3.33±1.033)有所升高，與空白對照(1.17±0.408)比，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計學意義；糖水偏愛

6、度(47.83±6.338)有所降低，與空白對照組(86.50±3.782)相比，P＜0.01，差異具有統(tǒng)計學意義；模型組大鼠血漿的CORT(3.570±1.253)有所升高，與空白對照組(1.343±0.824)相比，P＜0.01，差異具有統(tǒng)計學意義；模型組大鼠血漿的ACTH(55.312±4.665)有所升高，與空白對照組(34.430±3.813)相比，P＜0.01，差異具有統(tǒng)計學意義。Escitalopram低、中、高劑量組均能

7、改善大鼠的行為學，使Escitalopram低、中、高劑量組大鼠水平運動得分有不同程度提高(72.17±19.692，66.33±13.486，73.00±20.572)，與模型組相比，P＜0.01，差異具有統(tǒng)計學意義；Escitalopram低、中、高劑量組大鼠垂直運動得分分別為8.50±2.07、11.00±3.85、14.33±3.14，與模型組相比，P＜0.01，差異具有統(tǒng)計學意義；Escitalopram低、中、高劑量組大鼠理

8、毛次數(shù)(2.50±1.871、2.67±2.160、3.33±1.033)都有所增長，Escitalopram高劑量組與模型組相比，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計學意義；Escitalopram低、中、高劑量組中央格停留時間分別為1.33±0.516、1.33±0.522和1.17±0.408，與模型組相比有所減少，P＜0.01，差異具有統(tǒng)計學意義;Escitalopram低、中、高劑量組大鼠糖水偏愛度有所上升(83.33±8.618、86

9、.50±8.803、76.17±14.580)，與模型組相比，P＜0.01，差異具有統(tǒng)計學意義。在大鼠血漿中，Escitalopram低、中、高劑量組CORT有所降低(2.457±1.105、2.190±1.594、1.282±0.516)，Escitalopram中劑量組與模型組相比，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計學意義；Escitalopram高劑量組和與模型組相比，P＜0.01，差異具有統(tǒng)計學意義；Escitalopram各組大鼠血漿

10、中ACTH有所降低(49.737±4.911、36.223±10.878、35.345±13.047)，Escitalopram中、高劑量組與模型組相比，P＜0.01，差異具有統(tǒng)計學意義。(2)免疫組化結果顯示空白對照組大鼠海馬區(qū)磷酸化CREB和BDNF陽性細胞表達較多，模型組大鼠海馬區(qū)磷酸化CREB和BDNF表達明顯減少，而給予不同劑量Escitalopram后，其Escitalopram低、中、高劑量組陽性細胞均有不同程度的上升。(

11、3)采用MTT法測定，皮質酮(0.2mmol.L-。)誘導PC12細胞48小時后，模型組PC12細胞存活率明顯下降(0.557±0.044)，而分別給予Escitalopram低、中、高劑量(ESC6.25μmol·L-1，ESC12.5μmol·L-1，ESC25μmol·L4)后，Escitalopram低、中、高劑量組細胞存活率與模型組相比，均有不同程度的增高，其數(shù)值分別為0.747±0.195、0.994±0.108和1.091

12、40.101，Escitalopram低劑量組與模型組相比，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計學意義；Escitalopram中、高劑量組與模型組相比，P＜0.01，差異具有統(tǒng)計學意義。 結論：(1)慢性輕度不可預見性應激加孤養(yǎng)可使大鼠行為學及神經(jīng)內分泌發(fā)生異常改變，引起抑郁狀態(tài)，行為學及血漿中皮質醇和促。腎上腺皮質素均會發(fā)生改變。Escitalopram可以改善慢性應激抑郁模型動物的行為學，使得體內血漿CORT和ACTH含量恢復正常，

13、提示其作用機制之一可能與作用于海馬，阻斷應激對下丘腦-垂體-腎上腺軸的刺激作用及維持下丘腦-垂體-腎上腺軸的穩(wěn)定有關。(2)抑郁癥能夠引起神經(jīng)元的死亡，而研究表明，cAMP-CREB通路的激活介導BDNF表達并促進神經(jīng)元再生，通過免疫組化的方法來檢測大鼠海馬中磷酸化CREB和BDNF的表達，Escitalopram很可能通過此途徑來使得BDNF高表達，從而起到神經(jīng)元再生來達到治療抑郁癥的作用。(3)離體實驗采用皮質酮誘導的PC12細胞模