RNA干擾Jagged1基因對腎透明細胞癌細胞的影響及其機制的研究.pdf

1、目的：（1）探討Jagged1、VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3蛋白在腎透明細胞癌臨床的意義。（2）觀察干擾沉默Jagged1基因后腎透明細胞癌786-O細胞株細胞生物學的變化及對Akt/mTOR信號通路的影響。
　　方法：（1）免疫組化檢測Jagged1、VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3蛋白在52例腎透明細胞癌標本、癌旁組織及30例正常腎組織中的表達。（2）使用脂質體將Jagged1基因的SiRNA片段轉染786

2、-O細胞，RT-PCR及Western Blot的方法檢測Jagged1基因mRNA和蛋白。（3）應用MTT觀察Jagged1基因干擾沉默后腎透明細胞癌786-O細胞生長增殖情況；TUNEL檢測786-O細胞凋亡率的變化。（4)Western Blot檢測Jagged1基因干擾沉默凋亡相關蛋白Bcl-2、Bax、procaspase-3及Akt/mTOR信號通路相關蛋白 Akt、p-Akt、p-mTOR、p-P70S6K的表達變化。

3、r>　　結果：（1）Jagged1、VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3蛋白在腎透明細胞癌中的陽性率高于在癌旁組織和正常腎組織中的陽性率，腎透明細胞癌Jagged1、VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3蛋白的表達與患者年齡、性別無關(P>0.05)，而與腎癌細胞Fuhrman分級、腫瘤大小及 TNM分期相關(p＜0.05)。（2）Jagged1 siRNA沉默Jagged1 mRNA和蛋白的表達。（3）干擾Jagged1基因后腎

4、透明細胞癌786-O細胞增殖受到抑制，Jagged1 siRNA下調抑制凋亡基因BCL-2，上調Bax表達增強，啟動效益蛋白Procaspase-3，誘導細胞凋亡。（4）干擾Notch1基因可下調腎透明細胞癌786-O細胞p-Akt、p-mTOR、p-P70S6K的表達。
　　結論：Jagged1、VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3蛋白在腎透明細胞癌中有異常高表達，均與腎癌細胞Fuhrman分級、腫瘤大小及TNM分期相關，J