RSV–TLR3介導免疫應答與AECOPD發(fā)病機制相關研究.pdf

1、【目的】
　　通過檢測RSV、TLR3在AECOPD患者感染表達情況,探討其在COPD發(fā)生發(fā)展中的作用,揭示病毒介導的免疫炎癥反應可能參與了COPD發(fā)病機制;在肺上皮細胞實驗進一步探討了RSV感染后TLR3介導的免疫炎癥通路。
　　【方法】
　　通過收集AECOPD(20例)患者和正常對照人群(10例)痰液,用熒光定量PCR對痰液中TLR3mRNA檢測,并用槽式PCR檢測AECOPD患者痰液RSV;收集AECOPD患者

2、臨床資料,包括患者基本特征、血氣、血常規(guī)、肺功能、IL-6、PCT;應用Pearson相關分析法,分析TLR3與COPD的相關性;通過不同病毒滴度的RSV在6、12、18、24、36小時不同時間點感染A549肺上皮細胞,逆轉錄PCR檢測TLR3mRNA表達情況, Western Blot檢測TLR3、IRF3蛋白表達情況,免疫熒光檢測IRF3蛋白定位情況,ELISA法檢測細胞上清中IRF3激活介導的INF-β蛋白量,以及用ELISA檢測

3、細胞上清中TLR3-NF-kB信號通路介導的IL-6蛋白表達量。
　　【結果】
　　20例AECOPD組患者中RSV檢出4例,占20％。RSV檢出組FEV1占預計值的百分比、FEV1/FVC較未檢出組FEV1占預計值的百分比、FEV1/FVC低(P值分別為0.03,0.01)。RSV檢出組IL-6較RSV未檢出組高(P=0.04)。AECOPD組患者中TLR3mRNA含量較正常對照組痰液中TLR3mRNA含量升高,且具有統(tǒng)計

4、學意義(P=0.02)。檢出RSV組AECOPD組TLR3mRNA含量為,較未檢出RSV AECOPD組TLR3mRNA含量高(P=0.33),較對照組TLR3mRNA含量明顯升高,且具有統(tǒng)計學意義(P=0.03)。20名AECOPD患者中,痰液中TLR3mRNA表達增加與評價AECOPD嚴重程度的FEV1占預計值的百分比的減低有關(P=0.031 r=-0.482)。在RSV感染A549細胞中,與對照組相比,TLR3mRNA/蛋白明顯

5、增加,且具有時間濃度依賴。TLR3下游信號因子IRF3蛋白也較對照組明顯增加,具有時間濃度依賴性。RSV感染組INF-β含量較空白對照組INF-β含量增加(P=0.00),RSV感染組IL-6含量較對照組IL-6含量增加(P=0.00)。
　　【結論】
　　TLR3表達的增加與AECOPD患者肺功能下降相關。在RSV感染的肺上皮細胞中,TLR3在介導抗病毒作用同時,也產(chǎn)生大量的炎癥子,提示TLR3在抗病毒的同時可能也存在致病