β2SP對肝癌細胞誘導分化作用.pdf

1、目的：探討β2SP（β2血影蛋白）對肝癌細胞Huh7和SNU398誘導分化作用
　　方法：構建人的β2SP真核表達載體pcDNA3.1(-)-β2SP,酶切鑒定，測序證實。將構建成功的β2SP cDNA真核表達載體以及對照質粒pcDNA3.1(-)分別轉染肝癌細胞Huh7和SUN398,48h后Real-time RT-PCR和Western blot檢測β2SP在上述肝癌細胞中的表達情況。同時分析（1）β2SP對肝癌細胞Huh7

2、和SNU398腫瘤生物學特性的影響：CCK8法檢測細胞增殖；Western blot檢測細胞周期蛋白（CyclinA2、B1、D1、E1、CDK4）、凋亡相關蛋白C-caspase3以及p53、pRb；流式細胞儀分析細胞周期。（2）β2SP對肝癌細胞Huh7和SNU398誘導分化作用：Real-time RT-PCR分析肝臟功能蛋白（ALB、HNF1、HNF4、G6PC、OAT、ADH1、CRP、CYP7A1）和肝癌特異性腫瘤標志物AF

3、P的表達；Real-time RT-PCR分析肝癌干細胞表面標記物表達（CD133、CD90、EPCAM、CK19）。
　　結果：（1）經(jīng)過鑒定證實成功構建了真核表達載體pcDNA3.1(-)-β2SP。
　?。?）Real-time RT-PCR和Western blot結果顯示，β2SP cDNA真核表達載體轉染肝癌細胞Huh7和SNU398后，β2SP的表達明顯上調(diào)。
　?。?）β2SP cDNA真核表達載體轉染