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文檔簡介
1、目的:探討β2SP(β2血影蛋白)對肝癌細胞Huh7和SNU398誘導分化作用
方法:構建人的β2SP真核表達載體pcDNA3.1(-)-β2SP,酶切鑒定,測序證實。將構建成功的β2SP cDNA真核表達載體以及對照質粒pcDNA3.1(-)分別轉染肝癌細胞Huh7和SUN398,48h后Real-time RT-PCR和Western blot檢測β2SP在上述肝癌細胞中的表達情況。同時分析(1)β2SP對肝癌細胞Huh7
2、和SNU398腫瘤生物學特性的影響:CCK8法檢測細胞增殖;Western blot檢測細胞周期蛋白(CyclinA2、B1、D1、E1、CDK4)、凋亡相關蛋白C-caspase3以及p53、pRb;流式細胞儀分析細胞周期。(2)β2SP對肝癌細胞Huh7和SNU398誘導分化作用:Real-time RT-PCR分析肝臟功能蛋白(ALB、HNF1、HNF4、G6PC、OAT、ADH1、CRP、CYP7A1)和肝癌特異性腫瘤標志物AF
3、P的表達;Real-time RT-PCR分析肝癌干細胞表面標記物表達(CD133、CD90、EPCAM、CK19)。
結果:(1)經(jīng)過鑒定證實成功構建了真核表達載體pcDNA3.1(-)-β2SP。
?。?)Real-time RT-PCR和Western blot結果顯示,β2SP cDNA真核表達載體轉染肝癌細胞Huh7和SNU398后,β2SP的表達明顯上調(diào)。
?。?)β2SP cDNA真核表達載體轉染
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