運用血清學蛋白質組分析方法尋找乳腺癌相關抗原.pdf

1、目的:運用血清學蛋白質組分析方法尋找乳腺癌相關抗原。
　　方法:體外培養(yǎng)乳腺癌T-47D細胞，提取細胞總蛋白;T-47D細胞總蛋白經十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分離后轉膜，用對照血清和患者血清作為一抗進行蛋白質印跡(Western blot)分析，尋找差異反應蛋白條帶;T-47D細胞總蛋白經雙向電泳技術(2-DE)分離后轉膜，分別用20例對照血清和20例患者血清作為一抗進行Western blot分析，將

2、每一個蛋白點與對照血清和患者血清發(fā)生免疫反應的頻率進行統計學分析，找出具有顯著性差異的蛋白質點，該蛋白點用液相色譜-串聯質譜(LC-MS/MS)分析鑒定，并經NCBI數據庫檢索。
　　結果:SDS-PAGE的Western blot結果顯示T-47D細胞總蛋白與患者血清反應的蛋白分子量在22kDa-94kDa的范圍內;對T-47D細胞總蛋白進行3次雙向電泳重復性實驗，獲得了分辨率高、重復性好的雙向電泳圖譜，蛋白質點主要集中在分子量

3、為20.0kDa-94kDa和等電點pI4.0-7.0的范圍內;篩選出10個差異蛋白點，經質譜鑒定為HSP90、HSP60、HSP27、ER-60、PGAM1、P4HB、EEF1G、核糖體蛋白P0、hypothetical protein和unnamed protein product。
　　結論:乳腺癌患者血清中的抗體表達水平發(fā)生改變;篩選出的10個差異表達的蛋白分別涉及到分子伴侶、能量代謝、細胞信號等多種功能相關的蛋白質，這可