Hedgehog信號通路及TGF-β激活性激酶1在胰腺癌發(fā)病及預后中的作用研究.pdf

1、胰腺癌(pancreatic cancer，PC)是消化系統(tǒng)較常見、惡性程度較高的腫瘤之一。胰腺癌發(fā)病隱匿，早期在臨床上缺乏特異表現，惡性程度高，極易出現早期局部侵犯和轉移，在確診時絕大多數的病人已存在局部或廣泛轉移，不能行手術切除，5年生存率＜6％。因此提高胰腺癌的早期診斷率，是實現早期治療、改善患者生存率和死亡率的關鍵。目前臨床上尚缺乏有效的非創(chuàng)傷性早期篩查手段，因此迫切需要研究和揭示胰腺癌的分子發(fā)病機制，為其早期診斷及優(yōu)化治療提供

2、新的分子靶點。
　　 Hedgehog(Hh)信號通路異常激活在胰腺癌中是普遍存在的，與其發(fā)生、發(fā)展密切相關。研究報道，Hh通路成員Shh和Gli1蛋白在胰腺癌組織中呈低到中度表達;Shh和Gli1蛋白的表達與一些臨床病理特征存在顯著的相關性。Hh信號通路負性調控因子Sufu蛋白在胰腺癌組織為陽性表達，而癌旁胰腺組織及正常胰腺組織中均未見表達。
　　 絲裂原活化蛋白激酶激酶激酶(MAPKKK)家族成員之一TGF-β激活性

3、激酶1(TAK1)是炎癥免疫、應激反應及腫瘤等過程中許多信號轉導連鎖反應的關鍵調控因子，近年來，文獻報道TAK1可通過多種形式誘導NF-KB的激活。而NF-KB的直接轉錄靶點之一便是Hh通路的配體Shh，NF-KB的激活與胰腺癌中Hh通路的活化有關。由此我們提出假設，在胰腺癌進展過程中，TAK1也發(fā)揮著作用，而且可能與Hh通路之間可能存在相互協調。
　　 基于上述研究現狀，本實驗通過檢測Hh信號通路主要成員(Shh、Gli1、S

4、ufu)和TAK1及其活化形式PTAK1在胰腺癌中的表達，分析兩條途徑與臨床病理參數的相關性，深入研究其在胰腺癌預后中的作用。本研究包括兩個部分內容，分述如下。
　　 一、人胰腺癌組織中Hh信號通路主要成員(Shh、Gli1、Sufu)和TAK1及其活化形式PTAK1表達與臨床病理特征的相關性研究
　　 目的:檢測在胰腺癌組織和相應癌旁組織中Shh、Gli1、Sufu、TAK1及PTAK1的表達情況，分析胰腺癌組織中5種

5、蛋白的表達與胰腺癌患者臨床病理特征的相關性。
　　 方法:收集2005年5月至2012年9月長海醫(yī)院手術切除的169例胰腺癌患者的胰腺癌組織和配對的35例癌旁組織，同時收集患者臨床資料。通過查閱病歷和電話隨訪獲得以下內容:人口學特征、病史、手術記錄、病理報告結果等。所有病例均經病理確診為胰腺導管腺癌。采用Envision（兩步法）免疫組織化學法檢測胰腺癌和癌旁組織中5種蛋白的表達。通過卡方檢驗或Fisher精確概率法與多因素lo

6、gistic回歸分析法，明確5種蛋白的表達水平與TNM分期、淋巴結轉移及遠處轉移等臨床病理特征的關系。
　　 結果:Shh、Gli1、Sufu、TAK1及PTAK1在胰腺導管腺癌組織中高表達者分別為105例(70％)、136例(84.5％)、46例(30.1％)、126例(80.3％)與130例(81.3％)。
　　 1、胰腺癌中Shh、Gli1、Sufu、TAK1及PTAK1表達量的相關性
　　 胰腺癌組織中S

7、hh、Sufu表達量呈正相關(P＜0.05)。
　　 胰腺癌組織中Gli1表達量分別與Sufu、TAK1表達量呈正相關(P＜0.05)。
　　 胰腺癌組織中Sufu表達量分別與Shh、Gli1、TAK1表達量呈正相關(P＜0.05)。
　　 胰腺癌組織中TAK1表達量分別Gli1、Sufu、PTAK1表達量呈正相關(P＜0.05)。
　　 2、Shh、Gli1、Sufu、TAK1及PTAK1表達與臨床病理

8、特征的關系
　　 腫瘤組織中Shh高表達與淋巴結轉移、遠處轉移、TNM分期明顯相關(P＜0.05)。
　　 腫瘤組織中Gli1高表達與腫瘤局部浸潤、分化程度顯著相關(P＜0.05)。
　　 腫瘤組織中Sufu高表達與淋巴結轉移顯著相關(P＜0.05)。
　　 腫瘤組織中TAK1高表達與腫瘤部位相關(P＜0.05)。
　　 (P)TAK1表達與上述特征無明顯相關性。
　　 3、Shh、Gli

9、1、Sufu、TAK1及PTAK1表達與TNM分期的關系
　　 單因素分析結果顯示，TNM分期分別與Shh表達、Gli1表達、Sufu表達、腫瘤部位、腫瘤分化程度潛在相關(P＜0.25)。
　　 單獨對Ⅰ期、Ⅱ期的病人進行了分析，得出以下結果:
　　 單因素分析結果顯示，TNM分期分別與Shh表達、Gli1表達、Sufu表達、TAK1表達、PTAK1表達、腫瘤部位、年齡潛在相關(P＜0.25)。
　　 多

10、因素分析結果顯示，Shh高表達、胰頭部胰腺癌與高等級TNM分期顯著相關(P＜0.05)。
　　 4、Shh、Gli1、Sufu、TAK1及PTAK1表達與淋巴結轉移的關系
　　 單因素分析結果顯示，淋巴結轉移分別與年齡、腫瘤部位、局部浸潤、遠處轉移、Shh表達、Sufu表達、PTAK1表達潛在相關(P＜0.25)。
　　 5、胰腺癌組織5種蛋白的表達水平明顯高于癌旁組織(P＜0.001)。
　　 多因素分

11、析結果顯示，Shh高表達、遠處轉移與淋巴結轉移明顯相關(P＜0.05)。
　　 結論:胰腺癌組織中TAK1表達量分別與Gli1、Sufu表達呈正相關，提示兩條途徑可能存在相互作用。胰腺癌組織Shh高表達與淋巴結轉移、遠處轉移、TNM分期明顯相關，Gli1高表達與腫瘤局部浸潤、分化程度顯著相關;Sufu高表達與淋巴結轉移顯著相關;Shh高表達是高等級TNM分期（單獨對Ⅰ期、Ⅱ期的病人進行分析）及淋巴結轉移的獨立預測因子;(P)TA

12、K1表達與上述特征無明顯相關性;胰腺癌組織上述蛋白的表達水平明顯高于癌旁組織，提示Hh信號通路在胰腺癌發(fā)生中發(fā)揮作用。
　　 二、人胰腺癌組織中Hh信號通路主要成員(Shh、Gli1、Sufu)和TAK1及其活化形式PTAK1表達與胰腺癌預后的相關性研究
　　 目的:分析胰腺癌組織中Shh、Gli1、Sufu、TAK1及PTAK1表達水平與胰腺癌患者預后的相關性。
　　 方法:收集2005年5月至2012年9月長

13、海醫(yī)院行手術治療的169例胰腺癌患者的病例。所有患者術前均未行化療、放療。調查內容包括人口學特征、個人生活習慣、病史、病理報告、實驗室檢查結果、總生存期等。通過查閱病歷、電話隨訪獲得上述資料。生存期隨訪截止時間為2013年2月6日。采用Kaplan-Meier法及Cox回歸分析法，評價上述蛋白在癌組織中的表達水平及這些蛋白的組合對患者預后的影響。
　　 結果:本研究共隨訪胰腺導管腺癌患者169例，年齡中位數為61歲（年齡范圍26

14、-82歲），其中男性占60.9％。隨訪時間中位數為11個月（時間范圍2.03-53.77個月）。排除術后一個月內死亡的病例后，共166例患者納入生存分析?；颊咧形豢偵鏁r間（95％可信區(qū)間）為11(9.45-12.01)個月。
　　 單因素分析結果顯示，患者總生存期分別與性別、遠處轉移、TNM分期、CA199、Gli1、Sufu、TAK1、PTAK1、分化程度和淋巴結轉移潛在相關(P＜0.25)。Gli1、Sufu、TAK1、P

15、TAK1低表達及遠處轉移、高等級TNM分期、血CA199高均與患者總生存期下降顯著相關(P＜0.05)。多因素分析結果表明，PTAK1低表達、CA199＞1000 U/ml、腫瘤分化程度低均為總生存時間下降的獨立預測因子(P＜0.05)。
　　 對蛋白組合變量的生存分析顯示:Gli1high/Sufuhigh組較Gli1high/Sufulow組、Gli1high/TAK1high組較Gli1high/TAK1low組生存期長(

16、P＜0.05)。Gli1high/PTAK1high組較Gli1high/PTAK1low及PTAK1high/Gli1low組生存期長(P＜0.05)。Sufuhigh/TAK1high組較Sufuhigh/TAK1low及TAK1high/Sufulow組生存期長(P＜0.05)。
　　 單因素生存分析顯示:組合變量Gli1high/Sufuhigh、Gli1high/TAK1high、Gli1high/PTAK1high、

17、Sufuhigh/TAK1high、Sufuhigh/PTAK1high、Gli1high/Sufuhigh/TAK1high與生存期較長顯著相關(P＜0.05)。多因素生存分析發(fā)現Gli1high/PTAK1high、Gli1high/Sufuhigh/TAK1high是預后好的獨立預測因子(P＜0.05)。
　　 結論:胰腺導管腺癌組織Gli1、Sufu、TAK1、PTAK1低表達與術后患者生存期下降顯著相關;PTAK1低表

18、達為總生存時間下降的獨立預測因子，提示兩條途徑與胰腺癌預后相關。Gli1、Sufu與(P)TAK1高表達組合變量Gli1high/Sufuhigh、Gli1high/TAK1high、Gli1high/PTAK1high、Sufuhigh/TAK1high、 Sufuhigh/PTAK1high、Gli1high/Sufuhigh/TAK1high與預后較好明顯相關:提示TAK1與Hh信號通路兩條途徑在胰腺癌發(fā)生發(fā)展中可能存在相互影響，