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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:探討胡桃楸根氯仿提取物對(duì)S180荷瘤小鼠體內(nèi)的腫瘤抑制作用以及從植物胡桃楸根氯仿提取物中分離出的單體化合物對(duì)腫瘤細(xì)胞抗增殖作用及機(jī)理的研究。
方法:1:按照標(biāo)準(zhǔn)方法給50只昆明種小鼠接種S180肉瘤后,給予胡桃楸根氯仿提取物10 d,觀察腫瘤質(zhì)量變化及胸腺(脾臟)指數(shù),比色分析法檢測(cè)血清超氧化物歧化酶 superoxided ismutase(SOD)的活性及丙二醛 malondialdehyde(MDA)含量的變化,采
2、用酶標(biāo)雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)血清TNF-α、IL-2水平。2:采用MTT比色法觀察從胡桃楸根氯仿提取物中分離出的5種醌類化合物對(duì)人胃癌細(xì)胞(MGC-803)、人肺癌細(xì)胞(A549)、人白血病細(xì)胞(K562)、人宮頸腺癌細(xì)胞(HeLa)、人宮頸鱗癌細(xì)胞(CASKI)以及人宮頸鱗癌細(xì)胞(SiHa)6種腫瘤細(xì)胞株的增殖抑制作用,篩選出活性最好的單體化合物進(jìn)行進(jìn)一步的機(jī)理研究;我們采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)早期細(xì)胞凋亡,結(jié)合倒置顯微鏡、HE染色、免
3、疫細(xì)胞化學(xué)染色方法檢測(cè)凋亡相關(guān)基因Bcl-2、Bax、p53的蛋白表達(dá),觀察其誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用。
結(jié)果:1:胡桃楸根氯仿提取物具有明顯的抑制腫瘤的作用,不同濃度的抑瘤率分別為48.37%、40.81%、36.52%,與模型對(duì)照組比較有顯著性差異(P<0.01);實(shí)驗(yàn)組的SOD活性高于模型對(duì)照組,而MDA含量低于模型對(duì)照組、TNF-α活性及IL-2誘生水平較模型對(duì)照組明顯增高(P<0.05);2:MTT檢測(cè)結(jié)果顯示,2號(hào)單
4、體化合物(5-羥基-2-甲氧基-1,4-萘醌)具有較強(qiáng)的細(xì)胞毒性。不同濃度5-羥基-2-甲氧基-1,4-萘醌處理的實(shí)驗(yàn)組人宮頸癌HeLa細(xì)胞的生存率呈濃度和時(shí)間依賴性降低,與對(duì)照組相比均有顯著性差異(P<0.001),其IC50值為3.75μmol/L;通過(guò)倒置顯微鏡觀察,對(duì)照組HeLa細(xì)胞增殖能力隨培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)明顯增強(qiáng),而實(shí)驗(yàn)組HeLa細(xì)胞增殖明顯受抑制。隨著時(shí)間的延長(zhǎng)和藥物濃度的增加,細(xì)胞抑制效果越明顯,藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)有量-效
5、、時(shí)-效關(guān)系;實(shí)驗(yàn)組HeLa細(xì)胞HE染色染色質(zhì)濃縮,呈深染的新月體形;應(yīng)用Annexin V/PI雙染色流式細(xì)胞儀檢測(cè)了早期HeLa細(xì)胞凋亡,未經(jīng)5-羥基-2-甲氧基-1,4-萘醌處理的正常HeLa細(xì)胞凋亡細(xì)胞極少,經(jīng)5-羥基-2-甲氧基-1,4-萘醌處理的細(xì)胞,凋亡細(xì)胞的百分比明顯高于正常對(duì)照組,其作用隨著劑量的增加和時(shí)間的延長(zhǎng)而增強(qiáng),具有量-效關(guān)系和時(shí)-效關(guān)系;免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果顯示,5-羥基-2-甲氧基-1,4-萘醌可下調(diào)Bcl
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