COX-2在食管上皮癌變中的作用及戊地昔布抗食管癌的機制研究.pdf

1、河北醫(yī)科大學博士學位論文COX2在食管上皮癌變中的作用及戊地昔布抗食管癌的機制研究姓名：張玉軍申請學位級別：博士專業(yè)：病理學與病理生理學指導教師：左連富齊鳳英20060401中文摘要師分別進行組織病理學診斷。采用免疫組織化學檢測COX一2蛋白的表達。70％乙醇固定的標本，采用流式細胞術(Flowcytometry，F(xiàn)CM)定量檢測COX一2蛋白表達。2戊地昔布抑制人食管癌Ecal09細胞增殖和誘導凋亡的機制取對數(shù)生長期的人食管癌Ecal

2、09細胞，用259L‘1胰蛋白酶消化，按1104個孔。接種于96孔板、6孔板和100mL的培養(yǎng)瓶中，待細胞貼壁6h后，輕輕吸去上清，加入濃度為400、200、100、50、25Ⅱm01L。的戊地昔布。同時設不含藥物的陰性對照和等體積DMS0的溶劑對照組，DMS0體積分數(shù)為016％。于培養(yǎng)24、48和72h后，采用MTT法檢測戊地昔布對Ecal09細胞的抑制作用，F(xiàn)CM法檢測細胞的凋亡率。采用透射電鏡及DNALadder進一步檢測細胞的凋

3、亡。LDH試劑盒檢測Ecal09細胞上清中LDH的含量：采用RTPCR檢測戊地昔布對食管癌細胞D38和Cox2mRNA的表達變化；免疫細胞化學及FCM檢測戊地昔布對食管癌細胞pp38、COX2及凋亡基因c—fos、cjun、Fas、FasL蛋白表達的影響。3p38MAPK特異性抑制劑SB203580對食管癌細胞凋亡及p38表達的影響將常規(guī)培養(yǎng)的食管癌Ecal09細胞分為對照組、400、200、100、50、25um01L’1的戊地昔布組

4、、各濃度戊地昔布SB203580(10um01L。1)組，繼續(xù)培養(yǎng)72h。FCM法檢測細胞的凋亡率、RTPCR檢測p38mRNA的表達變化、FCM法檢測sB203580對戊地昔布誘導的Ecal09細胞p_p38蛋白表達的影響。4戊地昔布對裸鼠食管癌移植瘤的抑制作用取BALB／C裸鼠12只，分別在裸鼠的左前和右后腋皮下按2106個細胞每個部位。接種人食管癌Ecal09細胞。隨機分為對照組6只(只給同等劑量的05％羧甲基纖維素鈉1和戊地昔布