脾氣虛證患者線粒體DNA多態(tài)性與超微結(jié)構(gòu)的初步研究.pdf

1、目的：對(duì)脾氣虛證患者十二指腸粘膜線粒體DNA (mtDNA)全序列與線粒體超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行初步探討，了解脾氣虛證與線粒體DNA多態(tài)性的相關(guān)性。 方法：參照已經(jīng)界定的排除標(biāo)準(zhǔn)，選擇病例；分脾氣虛證組、濕熱證對(duì)照組和正常對(duì)照組：對(duì)十二指腸粘膜的超微結(jié)構(gòu)在電鏡下進(jìn)行觀察；提取并擴(kuò)增線粒體DNA，行mtDNA全序列測(cè)定，對(duì)結(jié)果先BLAST，與劍橋序列進(jìn)行比對(duì)，記錄突變位點(diǎn)、突變種類、突變性質(zhì)、合成氨基酸的密碼子改變情況，利用Olige6.0

2、軟件進(jìn)行多基因序列比對(duì)分析，了解線粒體的多態(tài)性。 結(jié)果：1、脾氣虛證和濕熱證線粒體的結(jié)構(gòu)均有不同程度的改變；其中同一種疾病，脾氣虛證組與濕熱證組線粒體結(jié)構(gòu)的改變無(wú)明顯差異；而同一種證型，慢性淺表性胃炎組與十二指腸球部潰瘍組線粒體的改變差異明顯，慢性淺表性胃炎組線粒體的改變較輕，十二指腸球部潰瘍組線粒體的改變明顯；脾氣虛證十二指腸球部潰瘍組的線粒體有明顯的腫脹，變形，嵴減少或消失，有些線粒體有空泡形成，濕熱證球部潰瘍組線粒體也有腫

3、脹、變形、嵴減少或消失等改變，還有些聚集在一起。2、對(duì)11個(gè)標(biāo)本進(jìn)行了mtDNA全序列重疊測(cè)序，測(cè)出率達(dá)99％，每個(gè)序列分正向和反向測(cè)序兩次，有些序列多次重復(fù)檢測(cè)，結(jié)果穩(wěn)定。3、重疊測(cè)序后共檢測(cè)出堿基突變470個(gè)。突變類型有：?jiǎn)蝹€(gè)堿基突變和多個(gè)堿基突變，每種突變又包括堿基置換、堿基插入、堿基缺失；其中D-LOOP區(qū)斷共64個(gè)，t-RNA區(qū)段共53個(gè)，r-RNA段共77個(gè)，CDS段共276個(gè)。脾氣虛證組和慢性淺表性胃炎在D-LOOP區(qū)突變

4、率高于其他組，脾氣虛證和濕熱證十二指腸球部潰瘍組缺失突變高于其他組。4、移碼突變共107個(gè)，堿基置換突變共314個(gè)(包括同義突變83個(gè)，錯(cuò)義突變261個(gè)，無(wú)義突變15個(gè))。脾氣虛證在同義、錯(cuò)義、無(wú)義和移碼突變均等同或低于濕熱證；濕熱證在錯(cuò)義和移碼突變中突變數(shù)明顯增高；慢性淺表性胃炎組在同義突變中突變多，球部潰瘍組在錯(cuò)義、無(wú)義和移碼突變中突變多于其他組；脾氣虛證組在轉(zhuǎn)換、顛換方面均低于濕熱證組；脾氣虛證和濕熱證球部潰瘍組在插缺方面突變明顯