siRNA沉默TRIM25基因?qū)549-DDP細胞順鉑耐藥性及PKM2蛋白表達的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：通過沉默非小細胞肺癌耐順鉑細胞株A549/DDP細胞中的TRIM25基因，抑制E3泛素蛋白連結(jié)酶TRIM25表達，探討TRIM25對A549/DDP細胞株藥物敏感性、早期凋亡率，以及對腫瘤代謝中的關(guān)鍵酶---PKM2表達的影響，以期為腫瘤耐藥研究提供新的實驗依據(jù)。
　　方法：設(shè)計并合成針對TRIM25基因的特異性小干擾RNA(siRNA)片段，整合到質(zhì)粒后，轉(zhuǎn)染A549/DDP細胞。采用半定量PCR、定量PCR評價TRIM2

2、5基因沉默后對A549/DDP細胞TRIM25基因表達水平的影響；通過westernblot技術(shù)檢測TRIM25蛋白表達水平的影響；利用MTT實驗和流式凋亡實驗分別評價A549/DDP細胞在順鉑作用下耐藥性和凋亡等生物學功能；采用免疫熒光技術(shù)、westernblot技術(shù)同時檢測TRIM25與PKM2的蛋白表達量。
　　結(jié)果：1、轉(zhuǎn)染TRIM25siRNA后，半定量PCR、定量PCR結(jié)果一致，mRNA水平顯著下降,尤其是siRNA干

3、擾片段pGPU6-524mRNA水平顯著下降，表達率為10.8％。westernblot結(jié)果與定量PCR有相同趨勢，實驗組的TRIM25蛋白表達量下降，其中以pGPU6-524最為明顯。根據(jù)上述結(jié)果，選取干擾片段pGPU6-524進行后續(xù)功能實驗。
　　2、抑制A549/DDP細胞中TRIM25的表達，A549/DDP細胞耐藥指數(shù)（RI）下降為7.38，提高了其對順鉑的敏感性，同時上調(diào)了該細胞的早期凋亡率。
　　3、免疫熒光

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