microRNA-451對胰腺癌細胞化療敏感性的影響.pdf

1、背景：
　　 胰腺癌是一種預(yù)后極差的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，大部分患者就診時已屬于晚期，僅15％患者能行手術(shù)治療，但5年生存率低于10%。最近幾年，雖進行了大量胰腺癌放療和化療的研究，但是總體治療效果不理想，其一線治療藥吉西他濱總體有效率約20%，目前面臨著耐藥率高等問題。因此，胰腺癌耐藥仍是目前國內(nèi)外研究的難點和熱點。
　　 microRNA是一類長度為21-25nt的單鏈非編碼RNA。microRNA以干擾mRNA翻譯的方

2、式調(diào)控蛋白表達。近年來一系列研究發(fā)現(xiàn)其在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中起到廣泛的作用。
　　 在乳腺癌，非小細胞肺癌，結(jié)直腸癌中，microRNA-451都通過不同方式調(diào)節(jié)腫瘤對于不同藥物的化療敏感性。本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)microRNA-451的水平，在胰腺癌耐藥株和親本株中有差異。本實驗在前期研究的基礎(chǔ)之上，進一步研究microRNA-451在胰腺癌細胞株中對化療敏感性的影響和機制。
　　 研究目的：
　　 1、證實

3、microRNA-451在胰腺癌親本細胞株和耐藥細胞株中的表達差異；
　　 2、通過外源干預(yù)microRNA-451在胰腺癌細胞株中的表達，檢測胰腺癌細胞對吉西他濱化療敏感性的改變；
　　 3、探索microRNA-451調(diào)控胰腺癌細胞株對吉西他濱化療敏感性的機制。
　　 方法：
　　 1、通過實時熒光定量PCR檢測SW1990親本株和吉西他濱耐藥株間microRNA-451的表達差異；
　　 2

4、、應(yīng)用Lipofectamine2000瞬時轉(zhuǎn)染胰腺癌細胞株SW1990和MIA-PaCa2，CCK-8法檢測細胞在不同濃度吉西他濱處理下的抑制率，對比轉(zhuǎn)染組和對照組的化療敏感性；
　　 3、應(yīng)用AnnexinV/PI雙染法、Caspase-3活性檢測和Western Blot檢測轉(zhuǎn)染microRNA-451后，吉西他濱誘導(dǎo)胰腺癌細胞的凋亡水平及機制。
　　 結(jié)果：
　　 1、microRNA-451在SW199

5、0吉西他濱耐藥株中的平均表達水平為親本株水平的0.223倍(P=0.006)；
　　 2、在SW1990和MIA-PaCa2細胞系中提高microRNA-451水平可以提高胰腺癌細胞對吉西他濱的化療敏感性(P＜0.05)，降低microRNA-451水平可以降低胰腺癌細胞對吉西他濱的化療敏感性(P＜0.05)；
　　 3、(1)AnnexinV/PI雙染發(fā)現(xiàn)，在SW1990和MIA-PaCa2細胞系中，轉(zhuǎn)染microRN

6、A-451類似物后吉西他濱誘導(dǎo)的細胞凋亡明顯增加(P＜0.05)，轉(zhuǎn)染抑制物后吉西他濱誘導(dǎo)的細胞凋亡明顯降低(P＜0.05)；
　　 (2)Caspase-3活性檢測發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染microRNA-451類似物后細胞Caspase-3活性明顯高于轉(zhuǎn)染類似物對照組，轉(zhuǎn)染抑制物后細胞Caspase-3活性明顯降低；
　　 (3)Western Blot檢測細胞凋亡通路中的相關(guān)蛋白發(fā)現(xiàn)，Cleaved Caspase-3和Cleav

7、ed Caspase-9的水平在轉(zhuǎn)染microRNA-45l類似物后升高，轉(zhuǎn)染抑制物組后降低。
　　 結(jié)論：
　　 1、microRNA-451在SW1990吉西他濱耐藥株中的水平低于SW1990親本株，結(jié)果具有顯著性差異；
　　 2、上調(diào)胰腺癌細胞內(nèi)microRNA-451水平，可以提高胰腺癌細胞對吉西他濱化療敏感性。下調(diào)microRNA-451水平可以降低胰腺癌細胞對吉西他濱的化療敏感性；
　　 3、