TNF-α增強小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞免疫抑制作用的探討.pdf

1、目的:探討腫瘤壞死因子-α(TNF-α)對小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(bone marrow stromalcells，BMSCs)免疫抑制作用的影響。
　　方法:采用全骨髓貼壁培養(yǎng)法分離培養(yǎng)小鼠BMSCs，觀察其細胞形態(tài)學變化;應(yīng)用流式細胞術(shù)鑒定小鼠BMSCs表面標志物CD29、CD34和CD44的表達;應(yīng)用免疫熒光法檢測小鼠BMSCs的CXCR4的表達;通過油紅O和阿爾新蘭染色分別來鑒定BMSCs成脂和成軟骨誘導; Elisa試劑盒

2、檢測細胞培養(yǎng)上清液中白介素-10(IL-10)和前列腺素2(PGE2)的表達;通過免疫印跡實驗(Western Blot)檢測培養(yǎng)細胞的環(huán)氧化物水解酶2(COX-2)和NF-κB蛋白水平的表達。
　　結(jié)果:體外培養(yǎng)的小鼠BMSCs快速貼壁并呈現(xiàn)克隆性生長，集落中心增殖的細胞大多為圓形，邊緣細胞呈梭形;流式細胞術(shù)鑒定觀察到小鼠BMSCs表面標志物CD29陽性表達率為84.89％，CD44陽性表達率為95.77％，而CD34呈陰性表達

3、;免疫熒光檢測到CXCR4的陽性表達率達到100％;油紅O和阿爾新蘭染色后明顯看到BMSCs分化為脂肪細胞及軟骨細胞; Elisa試劑盒檢測25ng/ml和50ng/mlTNF-α處理組上清液中IL-10的表達水平和對照組相比沒有明顯的增加，而在100ng/mlTNF-α刺激時，細胞上清液中IL-10的表達水平較對照組明顯增加(p=0.002＜0.05)，而細胞上清液中PGE2的表達也有相似的結(jié)果，在100ng/mlTNF-α刺激時，P