內切殼聚糖酶的固定化及其酶學性質初步研究.pdf

1、固定化酶技術是現代生物工程技術的重要組成部分之一，在醫(yī)學、食品、環(huán)境和分析等領域有著廣泛的應用，是生命科學領域的研究熱點。本論文對本實驗室自制的高活性內切殼聚糖酶固定化條件及固定化酶的酶學性質進行了初步研究。 目的：通過實驗，選擇固定化內切殼聚糖酶最適宜的載體與方法，制備出適合于實際生產的固定化內切殼聚糖酶，并對該固定化酶與游離酶的酶學性質進行比較研究，有助于指導低分散度殼寡糖批量生產。 方法： 1．使用改良的方

2、法，制備較高氨基含量的硅膠載體，用于內切殼聚糖酶的固定化 2．對氨基化硅膠、氨基化樹脂、環(huán)氧化瓊脂糖微球三種載體進行性質分析與檢測，得出單位質量載體的功能基團含量。 3．采用戊二醛法、三聚氯氰法、溴乙酸法、碳二亞胺法以及以環(huán)氧法制備固定化內切殼聚糖酶，并對其蛋白回收率、酶活回收率、相對酶活力進行比較，選用最佳的固定化酶載體與方法。 4．對上述最佳的固定化酶方案進行優(yōu)化，包括酶濃度、最佳的交聯時間、交聯溫度、pH值

3、以及交聯劑的濃度等固定化條件的分析。 5．對固定化內切殼聚糖酶的酶學性質進行初步研究，并與游離酶進行比較。 結果：經固定化酶的活力回收率、酶蛋白交聯率及穩(wěn)定性測定，確定以氨基化樹脂為載體，碳二亞胺法固定化效果最好。最佳反應條件為：酶濃度為2．5U/mL；水溶碳二亞胺（EDC．HCl）溶液為0．06mol/mL，交聯時間為3h；最適交聯pH值為6．5；最適交聯溫度為8℃。在最佳條件下制備的固定化酶活力為0．87U/g（濕重