苦瓜色素與色素蛋白的提取及生物學特性的研究.pdf

1、苦瓜（MomordicacharantiaL.）系葫蘆科草本植物，富含多種營養(yǎng)成分，作為一種傳統(tǒng)的蔬菜和中藥，具有藥膳同源之功效。其子衣色素可以作為一種天然食用色素，廣泛應用于食品、日化、醫(yī)藥等行業(yè)。不僅可作為添加劑為食品著色，有的品種由于保留了植物體內(nèi)的多種天然活性物質，如維生素、氨基酸、核苷酸、小分子活性肽、芳香物質及某些必需元素等，還兼有營養(yǎng)保健功能。本試驗以不同成熟度苦瓜子衣為材料，應用硫酸銨沉淀法和雙水相提取法均得到苦瓜色素蛋

2、白;經(jīng)過DEAE-52陰離子層析、SephadexG-100凝膠柱層析進一步分離純化苦瓜色素蛋白;同時運用生化-分子生物學技術研究純化苦瓜色素蛋白的生物學特性及抗氧化性。主要試驗結果有:
　　 1.通過紫外可見吸收光譜圖可以得出苦瓜色素的最大吸收波長為474nm，由正交試驗可以確定苦瓜子衣色素提取的最佳條件為:溫度50℃，料液比為1/40g/ml，時間為30min時苦瓜色素的提取率最高為45.54％。
　　 2.純化苦瓜

3、子衣色素具有較好的穩(wěn)定性。但是高溫、強光照、在偏酸或偏堿的環(huán)境、氧化劑還原劑的存在，以及高濃度的金屬離子都會對苦瓜子衣色素的穩(wěn)定性構成威脅，因此提取時要盡量避免。
　　 3.通過薄層層析可以得出苦瓜子衣色素中有至少有兩種比較多的色素:β-胡蘿卜素和番茄紅素。
　　 4.40％、40％-80％硫酸銨分級制備蛋白SDS-PAGE凝膠電泳結果顯示:40％硫酸銨沉淀蛋白主要含有一種，分子量約為20kD;即沒有差異條帶。而40％-

4、80％硫酸銨出多種蛋白質并且包含差異條帶。用雙水相法提取的各階段的蛋白質SDS-PAGE凝膠電泳，二者均用凝膠處理軟件BandScan5.0對圖像進行處理，結果均發(fā)現(xiàn)目的條帶。
　　 5.40％-80％硫酸銨沉淀的蛋白上DEAE纖維素柱，得到兩個吸收峰，再過SephadexG-100柱進一步純化得到目的蛋白，SDS-PAGE電泳圖片顯示:純化苦瓜色素蛋白的分子量為74.1kD，等電點為7.2，存在鏈間二硫鍵。
　　 6.

5、純化苦瓜色素蛋白和40％-80％硫酸銨沉淀蛋白清除羥自由基的能力相差不大。都是隨著質量濃度的增加抗氧化性增強，但是，前者在同等的質量濃度下均稍弱于后者。二者均不及抗壞血酸的抗氧化性。
　　 本研究確立了苦瓜色素的最佳提取條件，對子衣色素進行了的定性分析以及對色素穩(wěn)定性進行了探究，分離純化出與色素形成相關聯(lián)的色素蛋白，并得出了其生物學特性，和抗氧化性的效果，因此色素形成與色素蛋白存在密切相關，色素蛋白在色素形成中的作用機理有待探討