魚過(guò)敏原的腸道可控釋放及誘發(fā)免疫耐受的機(jī)制.pdf

1、魚類作為受人歡迎的食物，營(yíng)養(yǎng)豐富、味道鮮美，但魚肉中存在的過(guò)敏原使許多消費(fèi)者望而卻步，嚴(yán)重影響消費(fèi)群體的擴(kuò)大化。目前針對(duì)食物過(guò)敏的處理方法主要有兩種，消除食物中過(guò)敏原的活性或治療食物過(guò)敏產(chǎn)生的癥狀。但這兩種方法治標(biāo)不治本，過(guò)敏患者不能從根本上擺脫食物過(guò)敏的困擾，只能食用經(jīng)特定處理的食物或隨時(shí)治療過(guò)敏癥狀。立足以上問(wèn)題，本研究旨在制備一種安全有效的，能夠使機(jī)體對(duì)過(guò)敏原產(chǎn)生免疫耐受的食物，令過(guò)敏患者從根本上擺脫無(wú)法食用過(guò)敏食物的困擾。

2、>　　本論文以魚類過(guò)敏原為對(duì)象，以海藻酸鈉為包埋基質(zhì)，制備兩種具有緩釋作用的可食用微球，經(jīng)優(yōu)化、表征、體外釋放選擇出一種微球應(yīng)用至過(guò)敏機(jī)體使之產(chǎn)生口服免疫耐受，最后探討其產(chǎn)生耐受的機(jī)制。主要內(nèi)容如下：
　　1.提取純化魚類主要過(guò)敏原——小清蛋白。以大菱鲆為原料，采用鹽析、凝膠層析等方法對(duì)小清蛋白進(jìn)行純化，獲得分子量為12kDa的電泳純小清蛋白，得率為0.286％，經(jīng)免疫印跡檢測(cè)顯示其具有免疫活性。
　　2.比較兩種緩釋微球的

3、包埋及體外釋放行為，獲得適用于小鼠口服免疫耐受試驗(yàn)的材料。首先采用滴注法制備出海藻酸鈉-小清蛋白微球，達(dá)到最佳包埋率的制備條件為：3%海藻酸鈉溶液滴入pH為1.0的5%CaCl2溶液。FTIR、DSC及SEM等的結(jié)果顯示微球表面粗糙，并分布有大量的微小孔洞，小清蛋白成功包埋入微球。體外釋放試驗(yàn)顯示其體外釋放率最大可達(dá)61%，釋放動(dòng)力學(xué)符合Higuchi模型、Ritger-Peppas模型，釋放機(jī)制為骨架溶蝕蛋白擴(kuò)散。采用乳化法制備出海藻

4、酸鈉-小清蛋白微球，得到小清蛋白的包埋率（83.79%）較滴注法包埋率提高，粒徑降低，釋放率可達(dá)73%，釋放動(dòng)力學(xué)符合零級(jí)釋放動(dòng)力學(xué)模型，釋放機(jī)制為線性擴(kuò)散。比較而言，乳化法得到的海藻酸鈉-小清蛋白微球粒徑小、包埋率高、釋放效率高且緩釋時(shí)間長(zhǎng)，此種微球適宜作為口服免疫耐受的原料。
　　3.證實(shí)緩釋微球激發(fā)過(guò)敏原口服免疫耐受的有效性，探究其免疫耐受機(jī)制。相較于過(guò)敏模型組，口服微球耐受的小鼠機(jī)體特異性IgE抗體的產(chǎn)生量減少25.85%

5、，總IgE抗體減少36.61%，血清IL-4減少27.75%，說(shuō)明機(jī)體產(chǎn)生了免疫耐受效果。從劑量角度來(lái)講，低劑量口服過(guò)敏原的效果更佳；從蛋白狀態(tài)來(lái)講，經(jīng)微球包埋的過(guò)敏蛋白與溶解狀態(tài)的蛋白溶液均可激發(fā)免疫耐受反應(yīng)，且蛋白經(jīng)微球的包埋與緩釋作用后，耐受過(guò)程的安全性有所提高。分析耐受的機(jī)制，口服低劑量魚類過(guò)敏原促進(jìn)機(jī)體產(chǎn)生IgG抗體，使機(jī)體特異性IgE抗體的產(chǎn)生量減少，并促使機(jī)體免疫系統(tǒng)Th2細(xì)胞向Th1細(xì)胞轉(zhuǎn)化，恢復(fù)Th1、Th2細(xì)胞間的平