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文檔簡介
1、人類可以感知到甜、酸、苦、咸、鮮5種基本的味覺,甜味作為其中最重要的一種味覺,預(yù)示著身體的能量來源—碳水化合物的存在。雌激素與甜味感知緊密相連,可以通過影響機體對甜味的感知能力而改變?nèi)藗儗μ妓衔锏臄z取,與肥胖、糖尿病的發(fā)生密切相關(guān)。但是對于雌激素和甜味感知之間關(guān)系的研究,目前仍然缺乏可靠的數(shù)據(jù)。本實驗以行卵巢切除術(shù)的C57BL/6小鼠為動物模型,采用行為學(xué)、分子生物學(xué)、形態(tài)學(xué)等技術(shù)手段,在整體水平上研究雌激素對小鼠甜味感知閾值、攝食
2、、體重變化、味蕾的數(shù)量、最大橫截面積和甜味信號傳導(dǎo)相關(guān)分子和蛋白在口腔及腸道中表達的影響。
本研究首先通過行卵巢切除術(shù)建立一個雌激素缺失的小鼠模型,通過檢測卵巢切除術(shù)后的小鼠體內(nèi)雌激素的含量、體重和攝食量來對模型進行驗證。在模型成功建立的基礎(chǔ)上,進一步采用行為學(xué)測試、免疫組化實驗、qRT-PCR和Western blot等實驗技術(shù)檢測卵巢切除術(shù)后不同時期(1W、2W、4W、6W和8W)雌激素對小鼠舌面上味蕾的形態(tài)、數(shù)目和味細胞
3、內(nèi)與甜味傳導(dǎo)相關(guān)的分子及蛋白表達量的影響,研究雌激素對小鼠甜味感知在外周和分子生物學(xué)方面的作用機理。結(jié)果顯示,行卵巢切除術(shù)后的小鼠血液內(nèi)雌激素含量明顯降低,體重顯著性增加。通過行為學(xué)測試發(fā)現(xiàn),雌激素缺乏的小鼠對安賽蜜和蔗糖的偏好閾值均提高了,并且降低了對低濃度時AK和蔗糖的偏好率,但通過對卵巢切除的小鼠給予雌激素替代治療后,其體重及對AK和蔗糖的偏好閾值和偏好率均恢復(fù)到正常對照組水平。研究了雌激素對外周味覺系統(tǒng)的影響,發(fā)現(xiàn)雌激素對味蕾的
4、形態(tài)和橫截面積沒有顯著性的影響。同時我們對甜味傳導(dǎo)相關(guān)的分子和蛋白在舌面和軟腭中的表達量進行了實驗,結(jié)果顯示,卵巢切除術(shù)后的小鼠,舌面上甜味受體T1R3的表達量顯著性降低,而軟腭上甜味信號傳導(dǎo)的關(guān)鍵基因 Gα-gustducin、PLCβ2、TRPM5的表達量也有降低的趨勢,并且在個別時間點上與對照組相比達到顯著性差異;在十二指腸和空腸中的實驗發(fā)現(xiàn),T1R3在十二指腸中表達量顯著低于對照組,在空腸中T1R3和TRPM5的表達量與對照組相
5、比也有降低的趨勢。綜上所述,雌激素增加了小鼠對甜味的敏感性,使小鼠對較低濃度的AK和蔗糖溶液顯示出偏好,而雌激素的缺失提高了小鼠對AK和蔗糖溶液的偏好閾值,降低了對低濃度時AK和蔗糖的偏好率。味覺的調(diào)節(jié)是多種組織和傳導(dǎo)通路協(xié)同作用的結(jié)果,這種行為學(xué)上的差異主要是雌激素影響了和味覺傳導(dǎo)通路中相關(guān)分子和蛋白的表達量,使甜味傳導(dǎo)關(guān)鍵信號分子 T1R3在分子和蛋白的表達水平顯著性降低,對TRPM5、PLCβ2、Gα-gustducin等相關(guān)信號
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