抗T-2毒素和脫氧雪腐鐮刀烯醇毒素的抗體制備和T-2毒素酶聯(lián)免疫分析檢測(cè)方法的建立.pdf

1、單端孢霉烯族類(lèi)毒素普遍存在于自然界中，主要由真菌產(chǎn)生。糧食在收獲，運(yùn)輸，儲(chǔ)存中被此類(lèi)毒素污染的機(jī)率很高，帶來(lái)了不可忽略的食品安全隱患。因此，建立一種方便、快速、可靠的檢測(cè)方法來(lái)檢測(cè)食品及谷物中毒素的含量是非常必要的。本研究的兩種毒素T-2及DON(deoxynivalenol)毒素，分別是單端孢霉烯族類(lèi)毒素A類(lèi)和B類(lèi)中重要的毒素，本文詣在建立其以ELISA為主的免疫學(xué)檢測(cè)方法。
　　 (1)從禾谷鐮刀菌的大米發(fā)酵產(chǎn)物中分離純化到

2、純度為97.7％的DON毒素，將高速逆流色譜與高效液相色譜法有效地結(jié)合，從300g大米發(fā)酵產(chǎn)物中獲得8mgDON毒素，用于和載體蛋白偶聯(lián)。
　　 (2)通過(guò)DMAP(dimethylamiopryidine)催化法，合成了T-2-HS，通過(guò)碳二亞胺法與載體蛋白結(jié)合得到3種完全抗原，分別為T(mén)-2-HS-BSA，T-2-HS-OVA，T-2-HS-KLH，質(zhì)譜鑒定其中的T-2-HS-BSA的偶聯(lián)比為2.63。以T-2-HS-BSA免

3、疫小鼠獲得了高效價(jià)的抗T-2毒素多克隆抗體，建立了T-2毒素的間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)方法。條件為：以20μg/mL的T-2-HS-KLH為包被原，封閉液為0.5%的卵清蛋白，多克隆抗體為一抗，標(biāo)準(zhǔn)品T-2毒素為競(jìng)爭(zhēng)毒素。該方法的檢測(cè)限為0.12μg/mL，線性范圍0.28-30.84μg/mL，IC50值為1.45μg/mL，樣品加標(biāo)回收率為92.0%-104.6%，變異系數(shù)為15.1%-34.0%。
　　 (3)采用DMAP