犬干擾素-γ的復(fù)性及活性測(cè)定.pdf

1、犬干擾素是治療犬病毒性疾病的一種有效手段，但以原核細(xì)胞表達(dá)的干擾素多以包涵體形成存在，為無(wú)生物學(xué)活性的蛋白質(zhì)，需要經(jīng)過(guò)體外重新折疊復(fù)性后才能恢復(fù)為具有生物活性的干擾素。稀釋復(fù)性是一種簡(jiǎn)單快捷的蛋白質(zhì)復(fù)性方法，也是研究其他復(fù)性方法的基礎(chǔ)。 本實(shí)驗(yàn)對(duì)表達(dá)犬干擾素-γ的pJLA605-CalFN-γ重組質(zhì)粒原核表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，對(duì)表達(dá)后的菌體經(jīng)溶菌酶作用后，超聲波破碎，獲得富含重組犬干擾素-γ的包涵體，洗滌后再通過(guò)8mol/L尿素

2、溶解，將溶解后的包涵體通過(guò)稀釋復(fù)性法進(jìn)行復(fù)性：探討了不同折疊促進(jìn)劑、加樣方式、溫度、pH值在稀釋法復(fù)性條件下對(duì)重組犬γ-干擾素體外折疊的復(fù)性影響；采用MDCK-VSV系統(tǒng)，通過(guò)細(xì)胞病變(CPE)效應(yīng)為基礎(chǔ)的結(jié)晶紫染色法測(cè)定復(fù)性后重組犬干擾素-γ的活性，用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定復(fù)性后的犬γ-干擾素的濃度。結(jié)果表明，每升誘導(dǎo)后的菌體經(jīng)8mol/L尿素溶解后，得到的包涵體總蛋白為285mg；利用0.5M精氨酸、0.5M鹽酸胍、2.0M尿素均能有效抑