青蒿素對支氣管哮喘患者外周血Th17-Treg細胞因子的影響.pdf

1、目的：
　　通過檢測青蒿素干預前后支氣管哮喘患者外周血中IL-10、IL-17、IL-25、IL-35的濃度變化，根據(jù)其對不同時期哮喘患者外周血中這些因子濃度變化的影響，探討青蒿素對支氣管哮喘發(fā)病機制及治療的影響。
　　方法：
　　1.隨機收集健康人20例作為健康對照組，以及緩解期和急性發(fā)作期的哮喘患者各20例作為實驗組，抽取每個人的清晨空腹外周靜脈血各5ml分別放置于肝素抗凝管中；
　　2.然后用Ficoll密

2、度梯度離心法分離制備單個核細胞液(PBMCs)，并用RPMI-1640完全培養(yǎng)液調(diào)整PBMCs液密度為2×107個/ml；
　　3.將健康組、緩解期組和急性發(fā)作期組哮喘患者的PBMCs液分別加入到24孔培養(yǎng)板內(nèi),同一標本的PBMCs液分別放于兩個孔內(nèi)，每孔加PBMCs液1ml；
　　4.健康組的兩個孔均加入RPMI-1640培完全養(yǎng)液10ul和細胞刺激劑2ul，而各放有緩解期組與急性發(fā)作期組患者PBMCs液的兩個孔中分別加入

3、RPMI-1640完全培養(yǎng)液10ul和細胞刺激劑2ul、青蒿素(0.16umol/ml)10ul和細胞刺激劑2ul；
　　5.然后將以上所有培養(yǎng)板放置于37℃、5％CO2孵箱中刺激培養(yǎng)24h；
　　6.收集培養(yǎng)板中所有的PBMCs液分別放置于標記好的空管中，3000r/min，離心20 min，留取PBMCs培養(yǎng)液上清于1.5ml的EP管中,放置于-80℃的冰箱保存?zhèn)溆茫?br>　　7.最后解凍-80℃的冰箱保存?zhèn)溆玫腜BM

4、Cs培養(yǎng)液上清,嚴格按照酶聯(lián)免疫吸附試驗法(ELISA)試劑盒說明書進行操作,檢測出所有標本的OD值,然后用相應的ELISA軟件計算出各組中炎癥因子IL-10、IL-17、IL-25、IL-35的濃度,并分析比較數(shù)據(jù)。
　　結果：
　　1.用1640干預時，Th17細胞分泌的細胞因子IL-17、IL-25的濃度在緩解期組和急性發(fā)作期組較健康組增高(P<0.05)，而急性發(fā)作期增高更明顯(P<0.05)；Treg細胞分泌的細胞

5、因子IL-10、IL-35的濃度在緩解期組和急性發(fā)作期組較健康組則降低(P<0.05)，急性發(fā)作期降低程度更大(P<0.05)；
　　2.青蒿素干預以后，緩解期組與急性發(fā)作期組中Th17細胞分泌的細胞因子IL-17、IL-25的濃度降低(P<0.05)，急性發(fā)作期組與緩解期組相比較降低更多(P<0.05)；而Treg細胞分泌的細胞因子IL-10、IL-35的濃度升高(P<0.05)，同樣青蒿素的干預對急性發(fā)作期各細胞因子濃度變化的

6、影響較緩解期更為顯著，差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　結論：
　　1.青蒿素可以調(diào)節(jié)哮喘患者PBMCs上清液中Th17/Treg細胞因子的濃度變化,降低Th17細胞分泌的細胞因子IL-17、IL-25的濃度,升高Treg細胞分泌的細胞因子IL-10、IL-35的濃度,即青蒿素可以顯著改善支氣管哮喘患者外周血中炎癥因子IL-10、IL-17、IL-25、IL-35的濃度指標；
　　2.青蒿素治療支氣管哮喘的機制可