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文檔簡介
1、心型脂肪酸結合蛋白(H-FABP)是低分子量的新型小細胞質的蛋白質,在正常情況下,血漿中濃度很低,在急性心肌梗死(AMI)發(fā)生1.5h后,血漿中H-FABP濃度急劇上升,因此可用于AMI早期診斷的標志物;同樣心肌鈣蛋白Ⅰ(cTnⅠ)在健康人血液內不含或含有很少量,但在心肌受損后,特別是AMI發(fā)生后,cTnⅠ能迅速地釋放入血,3~6h出現(xiàn)異常增高,因此可用于AMI中期診斷的標志物。本課題主要是研究膠體金試紙條在即時檢驗(Point-of-
2、Care Test,POCT)中的應用,將H-FABP單克隆抗體或者將H-FABP/cTnⅠ單克隆抗體包被在一個試紙條上制備膠體金免疫層析試紙條,該試紙條由膠體金作為標記物,運用雙抗夾心法原理,NC膜上的T線顏色會隨著待測樣品中的抗原濃度升高而變深來對AMI進行定性實驗,借助膠體金定量儀可以對H-FABP和cTnⅠ進行定量檢測。本課題探討了膠體金優(yōu)化的制備工藝,H-FABP膠體金試紙條的制備和性能指標的檢測以及H-FABP/cTnⅠ二聯(lián)
3、試紙條的制備和性能指標的檢測。
第一部分 綜述
綜述分為3個部分:第一部分主要是介紹POCT的發(fā)展狀況和應用技術;第二部分是介紹膠體金的發(fā)展、原理和制備方法,以及膠體金免疫層析技術的原理、分類、優(yōu)點和應用;第三部分是H-FABP和cTnⅠ的簡介和意義的介紹。
第二部分 H-FABP膠體金免疫層析試劑條處方工藝的研究
本部分探索了膠體金制備的優(yōu)化工藝,對膠體金與蛋白結合的單因素進行了考察以及分析樣品
4、墊和結合墊預處理液及金標恢復液,篩選合適的制備試紙條的材料,制備出性能優(yōu)良的膠體金試紙條。
第三部分 H-FABP膠體金試紙條性能指標的檢測
主要對心型脂肪酸結合蛋白(H-FABP)膠體金免疫層析試紙條的性能指標進行了檢測,結果表明層析速度為16.68mm/min,最低檢測限是小于0.01μg/mL,H-FABP的濃度在0.01-1μg/mL具有良好的線性關系,準確度的相對偏差為-0.399%,精密度均小于15%,試
5、紙條應在20℃~30℃檢測,儲存溫度為20℃左右,待測樣品用量為70μl,抗凝劑和不同樣本對檢測結果無干擾,臨床小樣本結果表明陽性和陰性的符合率達100%,H-FABP膠體金試紙條檢測結果與省內三甲醫(yī)院的臨床檢測結果一致。
第四部分 H-FABP/cTnⅠ二聯(lián)試劑條的制備和性能指標檢測
本部分是H-FABP/cTnⅠ二聯(lián)膠體金試紙條的制備和性能指標檢測,先分別將H-FABP和cTnⅠ的單克隆抗體1與膠體金結合,再噴涂
6、在經(jīng)預處理的結合墊上,37℃烘干待用;cTnⅠ和H-FABP的單克隆抗體2分別包被在T1線和T2線,37℃烘干待用,最后按第二章一樣組裝試紙條,實驗結果表明這兩種蛋白之間沒有交叉反應。同樣對該二聯(lián)試紙條的性能進行了檢測,實驗結果表明層析速度為16.431 mm/min,H-FABP和cTnⅠ的最低檢測限分別小于10ng/mL和0.3ng/mL,H-FABP的濃度在10-1000ng/mL和cTnⅠ的濃度在3.3-54ng/mL具有良好的
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