兔髓核細胞凋亡與BNIP3表達及意義.pdf

1、目的：
　　 探討髓核細胞凋亡程度與BNIP3表達的關系。為深入了解髓核細胞凋亡的機制提供實驗依據。
　　 方法：
　　 兔退變椎間盤髓核組織BNIP3表達檢測：健康3月齡雄性新西蘭大白兔40只，體重（2.3±0.2）kg，隨機分為對照組（n=10）及實驗組（n=20）。實驗組大白兔采用針刺L3、4、L4、5及L5、6 椎間盤制備椎間盤退變模型。于術后4、8周實驗組各取10只大白兔、對照組各取5只大白兔，通過MR

2、I 檢查評價手術椎間盤退變情況，采用組織學觀察和TUNEL 法檢查兔椎間盤髓核組織中凋亡細胞，用免疫組織化學染色法檢測兔椎間盤髓核細胞BNIP3的表達。
　　 體外缺氧條件下髓核細胞凋亡與BNIP3表達檢測：采用組織塊法原代培養(yǎng)兔NPCs，取一代細胞分別在正常氧和1％氧濃度下培養(yǎng)24、48、72小時，應用臺盼藍染色、流式細胞術及TUNEL 染色觀察缺氧對細胞凋亡的影響；采用免疫組化及RT-PCR觀察BNIP3在缺氧條件下培養(yǎng)的N

3、PCs中的表達情況。
　　 結果:
　　 兔退變椎間盤髓核組織BNIP3表達檢測：
　　 （1）MRI 檢查示實驗組未手術對照節(jié)段(L1、2、L2、3及L6、7)椎間盤均正常，術后4、8周手術節(jié)段椎間盤髓核信號強度呈逐漸降低趨勢。
　　 （2）組織學觀察及TUNEL 檢查示對照組椎間盤組織中髓核細胞密度高，偶見極少量散在的凋亡細胞存在。實驗組術后4周、8周時椎間盤組織內髓核細胞密度逐漸降低，存在較多的凋亡

4、細胞。
　　 （3）對照組椎間盤組織髓核細胞中無BNIP3蛋白表達；實驗組術后4周、8周椎間盤組織髓核細胞中BNIP3蛋白表達逐漸上調。體外缺氧條件下髓核細胞凋亡與BNIP3表達檢測：正常氧條件下BNIP3 沒有表達，缺氧條件下隨著培養(yǎng)時間的延續(xù)，NPCs 凋亡率不斷增加 BNIP3表達不斷增強。
　　 結論：
　　 （1）椎間盤的退變與髓核組織中細胞密度下降有關；（2）細胞凋亡是椎間盤髓核細胞減少的原因之一；（