磷酸鹽快速檢測(cè)試劑盒的研發(fā)及應(yīng)用.pdf

1、磷酸鹽既參與微生物細(xì)胞組成如磷脂、核酸以及多種輔酶的合成，同時(shí)還在核心糖代謝途徑EMP和HMP中發(fā)揮重要作用，因此，監(jiān)控微生物細(xì)胞的磷代謝對(duì)微生物細(xì)胞生長(zhǎng)與控制、代謝與代謝調(diào)控等方面具有重要意義，并有助于相關(guān)發(fā)酵過(guò)程控制新方法的建立提供新的依據(jù)。為此，本研究首先建立起磷酸鹽的快速檢測(cè)方法，并以此初步解析發(fā)酵過(guò)程中磷酸鹽消耗與菌體生長(zhǎng)、產(chǎn)物合成之間的關(guān)系，主要結(jié)果如下:
　　通過(guò)對(duì)磷酸鹽快速檢測(cè)操作參數(shù)的研究，優(yōu)化了磷酸鹽快速定量測(cè)

2、定方法，在此基礎(chǔ)上組建磷酸鹽快速檢測(cè)試劑盒，考察了本試劑盒的使用方法、儲(chǔ)存方法、測(cè)定pH以及測(cè)定溫度。試劑盒檢測(cè)的定量下限為9.75×10-8mol L-1，檢測(cè)誤差為1～3.2％，最適測(cè)定pH范圍為4.5～7.6。對(duì)復(fù)雜樣本與處理方法進(jìn)行了研究，獲得樣本預(yù)處理方法為:(1)待測(cè)樣品與等體積的2mol L-1 NaOH溶液混合，靜置10min;(2)在60℃條件下，向其中加入1/2體積的1mol L-1 HCl，使沉淀消失;(3)再向其

3、中加入2倍體積的無(wú)水乙醇，靜置10min，12000r min-1離心5min，取上清。
　　運(yùn)用本磷酸鹽定量測(cè)定試劑盒，對(duì)多種常見(jiàn)培養(yǎng)基原料（包括酵母粉、蛋白胨和玉米漿粉等）以及多種微生物（如大腸桿菌、地衣芽胞桿菌和黑曲霉等）發(fā)酵過(guò)程中的磷酸鹽含量進(jìn)行了定量分析，所測(cè)得結(jié)果與用國(guó)標(biāo)方法獲得的結(jié)果一致。
　　以重組大腸桿菌42-0＃為研究對(duì)象，研究了發(fā)酵過(guò)程中磷酸鹽含量變化規(guī)律，解析了大腸桿菌生長(zhǎng)和產(chǎn)酶過(guò)程與磷酸鹽消耗間的相