赭曲霉毒素A快速檢測試紙條的研制及其在谷物類制品中的應用.pdf

1、OTA是食品真菌毒素污染中常見的一種。廣泛分布于飼料及飼料原料中，被攝食后會累積在畜禽體內，主要危害動物體的腎臟，其次是肺、肝臟等。并且現在已有研究稱，OTA已經成為動物體腎病變的重要因素之一。而且近年來，動物OTA中毒事件也頻繁發(fā)生，已經通過食物鏈對人類健康構成嚴重威脅。因此許多國家對其制定了最高允許量，并建立了監(jiān)控檢測體系。
　　相對于傳統(tǒng)的OTA檢測方法，免疫膠體金是一種方便快捷的免疫檢測技術，在很多方面都有廣泛的應用，如臨

2、床分析、食品安全、環(huán)境檢測等，該方法具有耗時少、特異性強、靈敏度高、對操作人員無太高要求等優(yōu)點，因此在現代食品檢測領域中發(fā)揮著重要作用。
　　本實驗中制備的OTA膠體金試紙條，可以廣泛的應用于谷物類飼料的檢測。恰當的標記條件是試紙條產品制備中至關重要的一步。實驗中采用檸檬酸三鈉還原法制備膠體金，探索了幾個可能影響膠體金顆粒均勻性的因素。實驗發(fā)現，在制備膠體金過程中，采用煮沸后相繼快速加入氯金酸和檸檬酸三鈉的方式制備出的金粒更均勻；

3、金標制作中的離心條件為10000 r/min，20 min；最適pH為1 mL膠體金添加7μL，0.2 mol/L的K2CO3，最佳蛋白標記量為1 mL膠體金添加7μg單抗；T線上抗原的適宜包被濃度為0.4 mg/mL，C線上羊抗鼠IGg的適宜包被濃度為0.4 mg/mL；金標抗體的復原液為pH8.5，0.02 mol/L Tris含1％BSA、5%蔗糖；樣品墊處理液為pH8.5，0.02 mol/L Tris中含1%BSA、1%Twe

4、en-20和0.5%蔗糖；試紙條的檢測靈敏度為15 ng/mL，與OTB、AFB1、DON、ZEN和T-2毒素的交叉反應率為0%，在室溫條件下至少可存放3個月。
　　檢測過程中，高效率的樣品提取液，也是該方法檢測中關鍵的一步。本實驗中以一定體積比的甲醇溶液，含有一定質量分數的NaHCO3作為提取液。經實驗驗證，大麥粉、蕎麥粉、燕麥片和全麥面包用55%（v:v）的甲醇-水，含3%的NaHCO3溶液能達到較為理想的提取效果，而谷物飼料