真武湯對大部分腎切除術所致尿毒癥心肌病小鼠心臟保護作用的研究.pdf

1、目的:
　　運用ZWT配方顆粒劑按比例混合成ZWT，干預行大部分腎切除術的小鼠，與蒸餾水處理的術后小鼠進行對比觀察，了解ZWT對UCM小鼠心臟結構和功能及腎功能的影響，并進一步探討其分子生物學機制，為深入闡明UCM發(fā)病機制，發(fā)掘UCM治療靶點，豐富中醫(yī)藥治療UCM的療效機理提供新思路與新途徑。
　　方法:
　　1.疾病模型的制作:大部分腎切除術
　　予1％戊巴比妥鈉50mg/kg腹腔注射麻醉小鼠，約2min后，小

2、鼠呈麻醉狀態(tài)，仰臥位固定小鼠，腹部備皮，消毒，鋪巾，沿腹中線切開皮膚，切口長約2cm，用棉簽小心暴露右腎，結扎右腎腎蒂后切除右腎。小心暴露左腎，切除左腎上級約1/3腎臟組織，明膠海綿壓迫止血，切除左腎下級約1/3腎臟組織，明膠海綿壓迫止血。左腎殘留腎門處約2mm寬腎臟組織。約5min后小心夾除明膠海綿，觀察切口有無滲血，若有滲血換明膠海綿繼續(xù)壓迫，若無則復位左腎，逐層縫合腹部切口。假手術組只剝離兩腎腎包膜。注意手術過程中勿損傷腎上腺。<

3、br>　　2.分組:
　　C57BL/6小鼠隨機分3組:假手術組、模型組和ZWT組。
　　3.干預:
　　ZWT組小鼠術后予ZWT灌胃，假手術組和模型組小鼠術后予等量蒸餾水灌胃。
　　4.檢測
　　(1)心臟彩超分別檢測:舒張期左室后壁厚度(LVPWd)、收縮期左室后壁厚度(LVPWs)、舒張期左室內徑(LVEDd)、收縮期左室內徑(LVESd)、左室射血分數(shù)(LVEF)及左室短軸縮短率(LVFS)，評估U

4、CM小鼠心臟功能狀態(tài)及結構改變;
　　(2)心臟組織HE染色觀察UCM小鼠心臟結構變化;
　　(3)運用摘眼球取血法收取小鼠血液，離心收集血清使用全自動化生化分析儀檢測血尿素氮(BUN)及血肌酐(Scr);
　　(4) Western blotting檢測心臟組織AMPK/p-AMPK及mTOR/p-mTOR的表達情況。
　　5.統(tǒng)計學分析
　　計量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差表示，使用SPSS19.0軟件處理，

5、數(shù)據(jù)行one-wayANOVA，組間兩兩比較方差齊時采用LSD法，方差不齊時采用Dunnett's T3法,P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。
　　結果:
　　1.一般情況
　　整個實驗過程中，假手術組小鼠無一死亡，模型組小鼠死亡2只，真武湯組小鼠死亡1只。與假手術組小鼠相比，模型組及真武湯組小鼠均有活動遲緩、食欲減退、毛發(fā)暗淡等表現(xiàn)，其中模型組小鼠精神狀態(tài)最差。
　　2.檢測結果
　　2.1 小鼠腎功能

6、指標變化
　　模型組小鼠尿素氮較假手術組明顯升高(P＜0.05)，模型組小鼠血肌酐較假手術組明顯升高(P＜0.05)，ZWT組小鼠尿素氮較假手術組明顯升高(P＜0.05)，ZWT組小鼠血肌酐較假手術組明顯升高(P＜0.05); ZWT組小鼠尿素氮較模型組無明顯變化，ZWT組小鼠血肌酐較模型組無明顯變化。
　　2.2 小鼠體質量、心臟質量、心臟指數(shù)(HW/BW)變化
　　模型組小鼠體質量較假手術組明顯降低(P＜0.05)

7、，ZWT組小鼠體質量較假手術組明顯降低(P＜0.05)，ZWT組小鼠體質量較模型組無明顯變化;模型組小鼠心臟質量較假手術組明顯增加(P＜0.05)，ZWT組小鼠心臟質量較模型組明顯降低(P＜0.05)，ZWT組小鼠心臟質量較假手術組無明顯變化;模型組小鼠心臟指數(shù)較假手術組明顯增加(P＜0.05)，ZWT組小鼠心臟指數(shù)較假手術組明顯降低(P＜0.05)，ZWT組小鼠心臟指數(shù)較模型組明顯降低(P＜0.05)。
　　2.3 心臟超聲

8、r>　　模型組小鼠LVPWd較假手術組明顯增大(P＜0.05)，ZWT組小鼠LVPWd較模型組明顯減小(P＜0.05)，ZWT組小鼠LVPWd較假手術組無明顯變化;模型組小鼠LVPWs較假手術組明顯增大（P＜0.05），ZWT組小鼠LVPWs較模型組明顯減小(P＜0.05)，ZWT組小鼠LVPWs較模型組明顯減小(P＜0.05);LVEDd，LVEDd，LVEF及LVFS無明顯變化，
　　2.4 心臟組織病理
　　假手術組小

9、鼠心肌細胞排列整齊，細胞核大小均一，胞漿染色均勻，心肌纖維排列整齊;模型組小鼠心肌細胞肥大，細胞核增大，形態(tài)不規(guī)則，核仁濃染，胞漿染色加深，心肌纖維增粗，排列紊亂;ZWT組小鼠心肌細胞病理改變較模型組減輕。
　　2.5 心臟組織Western blotting檢測
　　模型組小鼠與假手術組相比p-AMPK表達明顯降低，ZWT組小鼠與模型組相比p-AMPK表達明顯升高，模型組小鼠與假手術組相比p-mTOR表達明顯升高，ZWT組

10、小鼠與模型組相比p-mTOR表達明顯降低。
　　結論:
　　1.大部分腎切除術可使小鼠腎功能惡化，繼而出現(xiàn)心肌細胞肥大、左室肥厚等尿毒癥心肌病表現(xiàn)，即大部分腎切除術可用于制作尿毒癥心肌病動物模型，這很大程度上方便了相關人員對尿毒癥心肌病的研究;
　　2.運用真武湯干預尿毒癥心肌病小鼠后，小鼠心肌細胞肥大減少，心肌肥厚減輕，說明真武湯可抑制尿毒癥心肌病小鼠的心肌肥厚;
　　3.尿毒癥心肌病小鼠心肌肥厚與AMPK-m