GDF-15基因siRNA干擾質(zhì)粒和真核表達質(zhì)粒對人臍靜脈血管內(nèi)皮表達及增殖的影響.pdf

1、目的：
　　在體外觀察人GDF-15基因siRNA干擾質(zhì)粒和真核表達質(zhì)粒對人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞增殖及表達VEGF、bFGF的影響。
　　方法：
　　構(gòu)建人GDF-15基因siRNA干擾質(zhì)粒和GDF-15基因真核表達質(zhì)粒，分別轉(zhuǎn)染至HUVECs細胞中,實時熒光定量PCR檢測 GDF-15基因mRNA的表達水平，篩選出最佳的干擾序列。然后將細胞分為5組:空白對照組、干擾組、干擾對照組、真核表達組、真核表達對照組，用West

2、ern blot檢測各組細胞GDF-15蛋白的表達情況，并運用ELISA法檢測細胞上清液中VEGF、bFGF的含量，流式細胞儀檢測細胞周期，了解細胞的增殖情況。
　　結(jié)果：
　　1、實時熒光定量PCR結(jié)果顯示，HSH022853-24-CU6質(zhì)粒組的mRNA的表達明顯低于其它各組，抑制率約為92％，HSH022853-24-CU6為最佳干擾質(zhì)粒。真核表達組mRNA的表達顯著增高，達到其對照組的1000倍，且明顯高于其它各組。

3、
　　2、Western blot檢測目的蛋白，真核表達組的目的蛋白量最高，且明顯高于其它四組，干擾組最低，且明顯低于其陰性對照組和空白對照組；
　　3、ELISA結(jié)果顯示，空白對照組VEGF的表達顯著高于其它四組，但真核表達組、干擾組與各自的陰性對照組相比表達量幾乎相等，而各組的bFGF幾乎測不出；
　　4、流式細胞儀檢測細胞周期，進入G2期和S期的細胞比率以真核表達組最高，明顯高于空白對照組和干擾組，但是真核表達組