β-防御素1基因在小鼠乳腺組織中表達的研究.pdf

1、β-防御素具有廣譜的抗菌活性且是宿主闈有防御的重要參與者,在奶牛乳腺炎防治方面具有廣闊的應用前景。為了研究β-防御素1(β-defensin1,Defbl)基因在小鼠乳腺中的表達情況,本文以小鼠第四對乳腺組織為研究對象,用半定量RT-PCR法探討了小鼠乳腺發(fā)育周期(妊娠、泌乳、退化)中Defbl基因的表達規(guī)律及大腸桿菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)誘導小鼠乳腺炎時乳腺中Defbl基因表達的差異。
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2、、Defbl基因在小鼠乳腺組織中的表達。利用Genbank上已公布的小鼠Defbl基因序列,設計一對引物,小鼠乳腺組織提取總RNA進行RT-PCR,將PCR產物與pMD-19T載體連接后轉化劍DH5α感受態(tài)細胞中,篩選陽性克隆、測序,并進行序列比對。結果表明:Defbl基因在小鼠乳腺組織中有表達。
　　 二、小鼠乳腺發(fā)育周期中Defbl基因的表達規(guī)律。分別取小鼠妊娠1d、6d、12d、18d;泌乳1d、6d、12d、18d；21

3、天自然斷乳0d、1d、2d、3d、4d、5d的乳腺組織,采用半定量RT-PCR法進行研究。結果顯示:隨著妊娠的進行Defbl轉錄水平逐漸升高,且各時期差異顯著,妊娠18d轉錄水平最高；在泌乳過程中,Defbl轉錄水平呈下降趨勢,與泌乳1d相比,泌乳6d時Defb1mRNA水平下調,但差異不顯著,妊娠12d,18d Defbl的轉錄水平顯著下降；自然斷乳后Defbl基因表達量呈現先下降后上升再下降的變化趨勢,與0d相比,斷乳后第1d和第2

4、d mRNA水平即顯著降低,3d時Defbl轉錄水平出現顯著升高,達到峰值。此后4d,5d Defbl mRNA水平又下降。
　　 三、Defbl基因在LPS誘導的小鼠乳腺炎中的表達差異。按1.4μg/只劑量在泌乳10d母鼠第四對乳腺基部注射LPS,誘導小鼠乳腺炎。分別取注射LPS前(0h)和注射后6h、9h、12h、24h乳腺組織,采用半定量RT-PCR法研究Defbl表達量差異。結果顯示:與0h相比,誘導后各時期Defbl基