Fasudil對EAE小鼠脊髓內細胞Rock-Ⅱ表達的影響.pdf

1、目的：Rho/Rho 激酶(Rock)信號途徑是機體中普遍存在的信號轉導通路，參與調控細胞的增殖、粘附、移行等，被認為是控制細胞行為的上游信號分子。近來研究發(fā)現許多神經病理狀態(tài)均有Rock的激活，而應用Rock 抑制劑可改善臨床癥狀和病理狀況。本實驗應用Rho 激酶抑制劑Fasudil 治療C57BL/6小鼠EAE，觀察其臨床療效和潛在的免疫學機制，目的在于探討EAE的發(fā)病機制和應用Fasudil 治療EAE的作用機制，為EAE和MS的

2、免疫病理機制提供新的理論支持，也為今后臨床應用Fasudil 輔助治療MS等CNS 自身免疫性疾病提供實驗依據。
　　 方法：雌性C57BL/6小鼠隨機分為EAE組20只，Fasudil 干預組20只，佐劑組20只。
　　 EAE和Fasudil 干預組用髓鞘少突膠質細胞糖蛋白35-55（MOG35-55）進行免疫，建立EAE模型，佐劑組以等量生理鹽水代替MOG35-55作為EAE組的對照。Fasudil 干預組于免疫后

3、第7天腹腔注射Fasudil（50mg/kg/d），連續(xù)治療14天。EAE組和佐劑組給以等量生理鹽水作為對照。免疫后隔天觀察各組動物體重變化和發(fā)病情況，并按國際通用標準評定臨床癥狀。在免疫后4周處死動物，取小鼠脊髓腰膨大處，行HE 染色、Luxol Fast Blue 染色及間接免疫熒光染色，觀察各組小鼠病理變化及Rock-Ⅱ的表達情況。實驗數據采用SPSS13.0軟件進行分析。
　　 結果：
　　 1.利用MOG35-

4、55 多肽成功地誘導了C57BL/6小鼠EAE 模型。EAE組發(fā)病率100％（n=20），平均起病時間為13.35±1.31天，高峰期平均癥狀評分3.80±0.78，高峰期平均體重15.75±0.81。在發(fā)病后第12天開始相繼出現明顯的臨床癥狀，發(fā)病輕重不一，首先表現為進食減少，活動量減少，皮毛不光滑，體重減輕，尾部無力下垂，隨病情加重出現一側后肢癱瘓，進一步發(fā)展為雙側后肢癱瘓，不能自主翻身，嚴重者伴有前肢癱瘓，最高評分達到4分。Fas

5、udil 干預組發(fā)病率35％（n=20），較EAE組降低；平均起病時間15.55±1.50天，較EAE組明顯延遲（P<0.01）；高峰期平均癥狀評分2.24±0.26，較EAE組降低（P<0.05）；高峰期平均體重19.56±0.66，與EAE組相比差異顯著（P<0.05）。這4 項臨床指標比較，Fasudil 干預組與EAE組均有統計學差異。佐劑組未見發(fā)病，體重持續(xù)增加。
　　 2.HE 染色結果顯示，EAE組小鼠出現明顯炎性

6、細胞浸潤, Fasudil 干預組和佐劑組則炎性浸潤較輕，EAE組、Fasudil 干預組和佐劑組Okuda 炎性細胞浸潤評分呈明顯差異。EAE組炎性細胞浸潤評分3.25±0.56，Fasudil 干預組2.13±0.44，佐劑組1.38±0.78。EAE組和Fasudil 干預組、EAE組和佐劑組比較均有統計學意義（P<0.05）。Luxol Fast Blue 染色顯示，EAE組髓鞘脫失較Fasudil 干預組和佐劑組更明顯，且與病

7、情的嚴重程度呈正相關。
　　 3.Rock-Ⅱ在EAE組、Fasudil 干預組和佐劑組脊髓中均有表達，且表達情況與小鼠的病情輕重程度和臨床評分相一致,在EAE組血管內皮細胞明顯表達。觀察同一視野脊髓內Rock-Ⅱ陽性細胞的數量，EAE組小鼠為31.78±1.04，Fasudil 干預組20.22±1.56，佐劑組為18.50±1.39，EAE組和Fasudil 干預組、EAE組和佐劑組相比較有統計學差異（P<0.01）。

8、>　　 結果表明Fasudil 干預組Rock-Ⅱ的表達明顯低于EAE組。
　　 結論：
　　 1.用MOG35-55抗原乳劑免疫C57BL/6小鼠，可成功建立EAE 模型。
　　 2.Rho/Rock信號通路的激活與EAE 發(fā)病有關。
　　 3.Rock 抑制劑——Fasudil能夠降低EAE的發(fā)病率，緩解EAE 臨床癥狀，減輕炎性細胞的浸潤和髓鞘脫失。
　　 4.Rock 抑制劑――Fasu