竹節(jié)參總皂苷提取純化工藝及其抗腫瘤活性的初步研究.pdf

1、竹節(jié)參(Rhizoma Panacis Japonici)為五加科(Araliaceae)植物竹節(jié)參(Panax japonicus C.A.Mey.)的干燥根莖，屬土家族珍稀藥物資源。竹節(jié)參含多種三萜皂苷、多糖、豐富的氨基酸及微量元素等活性物質，兼具北藥人參滋補強壯和南藥三七活血化瘀之功效，是一種藥食兩用的天然植物，在臨床治療及保健功能上均具有廣泛的應用價值。目前對竹節(jié)參的研究主要集中在治療類風濕性關節(jié)炎藥物的開發(fā)上，竹節(jié)參總皂苷（T

2、otal saponins of Rhizoma Panacis Japonici，TsPJ）微波提取、大孔吸附樹脂純化工藝研究尚未見文獻報道，而其體外抗腫瘤活性方面罕有文獻報道。為了充分利用竹節(jié)參資源，開發(fā)以TsPJ為主要成分的新的藥物和新的中成藥制劑，本課題建立了TsPJ的含量測定方法，提出了適宜于TsPJ提取和純化的最佳工藝條件，并對其體外抗腫瘤活性作了初步的探索。主要研究內容和結果如下：
　　 1．TsPJ的含量測定

3、r>　　 選用人參皂苷Re為標準品，采用分光光度法，以5％冰乙酸-香草醛溶液和高氯酸為顯色劑，在552nm處測定吸光度。以人參皂苷Re的量(μg)為橫坐標，以吸光度(A)為縱坐標，制作標準曲線，經(jīng)計算得回歸方程為Y=0.0046X-0.0013(R2=0.9997)，在40.48～202.40μg范圍內線性關系良好，以此計算TsPJ的含量。經(jīng)方法學實驗結果顯示，在90min內吸收值穩(wěn)定，RSD為1.42%，精密度和重現(xiàn)性良好，RSD分

4、別0.75%和1.51%：平均回收率為100.46%(n=5)，RSD為1.06%。此法簡便靈敏，重現(xiàn)性良好，方法可靠，可作為竹節(jié)參總皂苷的定量方法。
　　 2．TsPJ提取工藝的優(yōu)選
　　 以TsPJ轉移率為考察指標，在單因素實驗的基礎上，運用正交實驗設計，篩選最佳微波提取工藝；并將其與加熱回流提取法及超聲提取法進行比較。結果表明，以80%乙醇為提取溶劑，微波功率400W，料液比1：18，提取4次，每次提取5min，T

5、sPJ的轉移率可高達97.77%。微波提取工藝具有效率高、時間短、能耗低、環(huán)保等優(yōu)點，為TsPJ的工業(yè)化生產和新藥開發(fā)提供了依據(jù)。
　　 3．TsPJ純化工藝的優(yōu)選
　　 采用靜態(tài)吸附和動態(tài)吸附考察相結合的方法，篩選了5種不同性質的大孔樹脂，最終初步確立了D-101型大孔樹脂分離TsPJ的純化工藝：上樣濃度為0.2g生藥.mL-，PH值為6，徑高比為1：10，以3BV70%乙醇溶液洗脫，吸附及洗脫流速均為1mL．min-

6、1。研究結果表明，未純化前總固物中總皂苷的含量為24.36%，純化后總固物中的TsPJ含量為82.53%，精制度達338.81%，且轉移率可達88.02%。從精制度、轉移率等方面考慮，該工藝適宜于TsPJ的分離及純化。
　　 4．TsPJ對肝癌HepG2細胞凋亡作用的考察
　　 采用四甲基偶氮唑藍(MTT)還原法檢測不同濃度的TsPJ對肝癌HepG2細胞增殖的作用；流式細胞儀分析腫瘤細胞凋亡率。結果表明，TsPJ可抑制肝