雷帕霉素對(duì)幼年期皮質(zhì)發(fā)育畸形大鼠腦發(fā)育的保護(hù)作用.pdf_第1頁(yè)
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1、目的:探討mTOR信號(hào)通路與X射線(xiàn)照射孕鼠后誘導(dǎo)的皮質(zhì)發(fā)育畸形(malformation of cortical development,MCD)大鼠模型之間的相關(guān)性,以及其抑制劑雷帕霉素對(duì)MCD大鼠腦發(fā)育的保護(hù)作用及其可能機(jī)制。
  方法:1、將懷孕后SD大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、溶劑組及雷帕霉素組,并于懷孕第16天開(kāi)始連續(xù)每天既定時(shí)間按以上分組分別給予不同的相應(yīng)預(yù)處理。其中,模型組、溶劑組及雷帕霉素組大鼠于懷孕第17天時(shí)使用

2、195cGy劑量X射線(xiàn)照射孕鼠。然后待上述懷孕母鼠自然生產(chǎn),其生產(chǎn)的第一代仔鼠(F1代)成為此次的實(shí)驗(yàn)對(duì)象,即為建立的MCD大鼠動(dòng)物模型。2、隨后每組子一代鼠分別于出生后當(dāng)天、第一天、第二天、第三天、第十天(即P0、P1、P2、P3、P10)共5個(gè)時(shí)間點(diǎn)每天分別隨機(jī)選取18只實(shí)驗(yàn)幼鼠,隨即斷頭取出腦組織。3、每組每個(gè)時(shí)間點(diǎn)將其中6只腦組織立即予以4%多聚甲醛PBS液固定,固定完全后使用游標(biāo)卡尺測(cè)量每只腦組織前后徑、上下徑、左右徑大小并記

3、錄,根據(jù)測(cè)量結(jié)果分析腦組織體積大小的差異,隨后將上述腦組織按一定比例進(jìn)行病理切片,最后行HE染色及Nissl染色分析腦組織病理改變。4、將每組每個(gè)時(shí)間點(diǎn)剩下12只腦組織立即凍于-80℃冰箱,分別后續(xù)進(jìn)行qPCR、Western blotting法檢測(cè)幼鼠皮層組織S6蛋白表達(dá)變化。
  結(jié)果:1、腦組織大體標(biāo)本經(jīng)肉眼觀(guān)察及游標(biāo)卡尺測(cè)量結(jié)果可見(jiàn),正常組幼鼠于各個(gè)觀(guān)察時(shí)間點(diǎn)腦組織前后徑以及除P0外其余時(shí)間點(diǎn)腦組織上下徑均大于使用X射線(xiàn)照

4、射后所產(chǎn)幼鼠(模型組、溶劑組、雷帕霉素組)徑線(xiàn),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05);而使用X射線(xiàn)照射后所產(chǎn)幼鼠腦組織各組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。但總體來(lái)說(shuō):模型組腦體積較正常組小,溶劑組與模型組相似,而雷帕霉素組較模型組體積大、趨于正常組。2、光學(xué)顯微鏡觀(guān)察到正常組幼鼠腦組織皮層及皮層下分層清楚,海馬結(jié)構(gòu)清晰,神經(jīng)元排列整齊,無(wú)異常大小及形狀神經(jīng)元,胼胝體正常存在;模型組幼鼠腦組織皮層結(jié)構(gòu)紊亂,胼胝體缺失,皮層、海馬區(qū)出

5、現(xiàn)異常神經(jīng)元結(jié)節(jié),神經(jīng)元排列不均、極性紊亂等;溶劑組與模型組病理改變無(wú)明顯變化;雷帕霉素組仍可見(jiàn)到上述改變,但較模型組及溶劑組病變少,趨向于正常組病理表現(xiàn)。3、qPCR結(jié)果提示模型組幼鼠檢測(cè)的5個(gè)時(shí)間點(diǎn)S6mRNA水平均高于正常組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05);溶劑組與模型組幼鼠各個(gè)時(shí)間點(diǎn)S6mRNA水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05);而雷帕霉素組幼鼠S6mRNA水平均低于模型組,仍稍高于正常組。4、Western blott

6、ing提示模型組幼鼠S6蛋白表達(dá)水平自P0開(kāi)始即顯示出明顯高于正常組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05);溶劑組與模型組S6蛋白表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05);雷帕霉素組S6蛋白表達(dá)量均低于模型組,且高于正常組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。
  結(jié)論:在實(shí)驗(yàn)條件下,1、195cGy劑量X射線(xiàn)照射孕17天母鼠后所產(chǎn)子一代可成功建立MCD模型結(jié)果,此方法操作簡(jiǎn)單,成功率高。2、該動(dòng)物模型證實(shí)了mTOR信號(hào)通路與X射

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