雞卵泡體細胞轉(zhuǎn)錄組研究及芳香化酶基因調(diào)控分析.pdf

1、卵巢發(fā)育是一個受多因子調(diào)控的動態(tài)過程。實驗證明，哺乳動物和禽類的卵巢發(fā)育過程在卵巢雌激素調(diào)控方面存在差異。芳香化酶（CYP19A1）是雄激素轉(zhuǎn)化為雌激素所需要的重要限速酶。本研究將圍繞雞卵泡顆粒細胞層以及膜細胞層，通過高通量測序技術(shù)檢測雞小黃卵泡中各細胞層轉(zhuǎn)錄組情況，利用生物信息學(xué)技術(shù)分析雞卵泡顆粒細胞層與膜細胞層基因表達特點;并運用轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)與牛卵泡顆粒細胞層與膜細胞層轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)進行比較，通過基因表達模式篩選出雞卵泡中可能調(diào)控芳香

2、化酶基因的潛在轉(zhuǎn)錄因子，并通過雙熒光素酶報告系統(tǒng)對候選轉(zhuǎn)錄因子進行驗證。主要研究結(jié)果如下:
　　(1)通過對雞卵泡各時期各細胞層CYP19A1表達譜的結(jié)果分析，發(fā)現(xiàn)芳香化酶在雞卵泡膜細胞層中高表達，并且在小黃卵泡時期表達量最高;
　　(2)對雞小黃卵泡膜細胞層以及顆粒細胞層進行轉(zhuǎn)錄組測序，通過分析得到膜細胞層特異表達基因179個，膜細胞層偏好表達基因196個，顆粒細胞層特異表達基因18個，顆粒細胞層偏好表達基因39個;

3、>　　(3)通過對雞小黃卵泡階段與牛卵泡分化及卵泡選擇兩個階段分別進行共表達網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建、通過對比發(fā)現(xiàn)雞小黃卵泡階段基因表達模式與牛卵泡分化期更為接近;對雞共表達網(wǎng)絡(luò)進一步分析，發(fā)現(xiàn)兩個與芳香化酶表達高度相關(guān)的基因模塊;
　　(4)通過對牛與雞相似卵泡發(fā)育階段基因表達模式的比較與篩選，確定ESR2為調(diào)節(jié)雞卵泡芳香化酶基因的候選轉(zhuǎn)錄因子;
　　(5)在細胞水平，通過雙熒光素酶報告系統(tǒng)驗證ESR2對CYP19A1啟動子片段活性有抑