芝麻抗莖點枯病NBS類抗病相關基因的克隆與分析.pdf

1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterCloningandAnalysisofNBStyperesistancegenesinsesameagainstMacrophominaphaseolinapathogenByMuYuSupervisor：ProfBaomingTian，HongyanLiuCropGeneticsandBreeding1一、●●●BlOe

2、nglneenngDepartmentMay2013摘要摘要芝麻是我國重要的油料作物之一，在芝麻生長過程中芝麻莖點枯病是嚴重威脅芝麻生產的一種真菌性病害。在芝麻病害防治上，除了化學防治，種植抗病品種是一種安全、有效的防病措施，但芝麻生產中可供利用的抗病品種還很少，所以克隆抗病基因，研究抗病機理，對于加快芝麻抗病育種進程具有重要意義。本研究利用前期獲得的芝麻抗莖點枯病NBSRGAs與河南省芝麻研究中心提供的EST序列比對結果設計特異引物，

3、從不同抗性的芝麻品種中克隆抗病相關基因。選擇高抗莖點枯病的芝麻品種“商水農家種”，及感病的芝麻品種“冀9014”、“和尚頭“，設置接莖點枯病菌及不接菌處理，利用qRTPCR技術分析了已克隆的基因表達模式，結果如下：1芝麻抗莖點枯病相關基因的克隆選取1l份對莖點枯病具有不同抗性的芝麻品種為材料，利用PCR技術，得到21個RGA基因，GenBank登錄號分別為KC477692～KC477707、KC771241～KC771243，它們編碼的

4、氨基酸序列均具有NBS類型抗病基因編碼蛋白的共有特征結構域P100p和NB—ARC結構。BLASTX分析結果表明，21個RGA的部分編碼蛋白序列與已知的含有NBARC信號傳導結構域的蛋白質、NBS—LRR類型抗病基因等的編碼蛋白同源性為35％～52％。利用MEGA40聚類分析發(fā)現這21個RGA基因聚為4類，分別命名為SIRGAl、SIRGA2、SIRGA8、SIRGAl2。2芝麻抗莖點枯病相關基因的表達模式分析實時分析已克隆基因在莖點枯

5、病菌誘導下親和組合與非親和組合中72h內的表達模式，結果表明：葉部組織中，除了SIRGA6只在親和組合中受到了誘導表達，其余在親和組合及非親和組合中均受到了誘導表達，其中SIRGAl、4、11、12基因在親和組合中的表達量高于非親和組合中的表達量，SIRGA2、8基因在非親和組合中的表達量要高于親和組合，S1RGA7基因在非親和組合和親和組合中表達量無明顯差異。莖部組織中SIRGAl、2、4、11、12均受莖點枯病菌的誘導表達上調，且在