N-甲基-D-天冬氨酸2B亞基在慢性?xún)?nèi)臟痛大鼠中樞敏化中的作用.pdf

1、第一章：N-甲基-D-天冬氨酸2B亞基在慢性?xún)?nèi)臟痛大鼠脊髓中樞敏化中的作用
　　 目的：本章節(jié)旨在觀察N-甲基-D-天冬氨酸2B亞基（NR2B）對(duì)慢性?xún)?nèi)臟痛大鼠痛覺(jué)敏感性的影響并探討其脊髓作用機(jī)制，為開(kāi)發(fā)其治療藥物提供新的作用靶點(diǎn)與思路。
　　 方法：選用新生SD大鼠，出生后8～14d內(nèi)，每天固定時(shí)間給予一次60mmHg壓力的結(jié)直腸刺激（CI）建立IBS慢性?xún)?nèi)臟痛模型，對(duì)照大鼠除了不行CI外，其他情況同模型大鼠。大鼠成年

2、后采用測(cè)量腹外斜肌對(duì)結(jié)直腸擴(kuò)張的放電反應(yīng)來(lái)評(píng)估腸道痛覺(jué)的敏感性。鞘內(nèi)分別給予25～150μg Ro 25-6981（NR2B選擇性拮抗劑）或0.1～1.0mg genistein（酪氨酸激酶拮抗劑），觀察其對(duì)模型大鼠內(nèi)臟痛敏反應(yīng)的影響；采用western blot方法觀察比較NR2B及Tyr-1472磷酸化NR2B在模型大鼠脊髓腰骶段的表達(dá)情況；并且觀察比較鞘內(nèi)給予上述拮抗劑后是否影響其表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1.慢

3、性?xún)?nèi)臟痛模型大鼠的特點(diǎn)
　　 ①模型大鼠內(nèi)臟痛敏反應(yīng)顯著高于對(duì)照大鼠。②模型大鼠遠(yuǎn)端降結(jié)腸及直腸局部組織未見(jiàn)明顯病理改變。
　　 2.Ro 25-6981對(duì)慢性?xún)?nèi)臟痛大鼠痛覺(jué)敏感性的影響
　　 鞘內(nèi)注射Ro 25-6981可劑量依賴(lài)性顯著降低慢性?xún)?nèi)臟痛大鼠內(nèi)臟痛敏反應(yīng)，且最佳作用時(shí)間約為給藥后0.5 h。
　　 3.Genistein對(duì)慢性?xún)?nèi)臟痛大鼠痛覺(jué)敏感性的影響
　　 鞘內(nèi)注射genistei

4、n可劑量依賴(lài)性顯著降低慢性?xún)?nèi)臟痛大鼠內(nèi)臟痛敏反應(yīng)，且最佳作用時(shí)間約為給藥后1h。
　　 4.NR2B在慢性?xún)?nèi)臟痛大鼠脊髓中的表達(dá)情況
　　 通過(guò)western blot的方法觀察結(jié)果顯示，NR2B在慢性?xún)?nèi)臟痛大鼠脊髓腰骶段的表達(dá)顯著高于正常大鼠；且慢性?xún)?nèi)臟痛大鼠鞘內(nèi)給予高劑量Ro 25-6981后NR2B表達(dá)未見(jiàn)明顯改變。
　　 5. Tyr-1472磷酸化NR2B在模型大鼠脊髓中的表達(dá)情況
　　 通過(guò)w

5、estern blot的方法觀察結(jié)果顯示，Tyr-1472磷酸化NR2B在慢性?xún)?nèi)臟痛大鼠脊髓腰骶段的表達(dá)顯著高于正常大鼠；且慢性?xún)?nèi)臟痛大鼠鞘內(nèi)給予高劑量Ro 25-6981或genistein后，Tyr-1472磷酸化NR2B的表達(dá)均顯著下降。
　　 結(jié)論：
　　 NR2B可能是通過(guò)激活其酪氨酸1472位點(diǎn)的磷酸化而參與慢性?xún)?nèi)臟痛脊髓中樞敏化的形成，有望成為慢性?xún)?nèi)臟痛藥物治療的新靶點(diǎn)。
　　 第二章：N-甲基-D

6、-天冬氨酸受體2B亞基在慢性?xún)?nèi)臟痛大鼠海馬場(chǎng)電位LTP中的作用
　　 目的：本章節(jié)旨在觀察海馬場(chǎng)電位長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)（LTP）在慢性?xún)?nèi)臟痛大鼠中樞敏化中的作用，及N-甲基-D-天冬氨酸受體2B亞基（NR2B）在其中的作用及機(jī)制。
　　 方法：選用新生SD大鼠，出生后8～14d內(nèi)，每天固定時(shí)間給予一次60mmHg壓力的結(jié)直腸擴(kuò)張刺激建立IBS慢性?xún)?nèi)臟痛模型，對(duì)照大鼠除了不行結(jié)直腸擴(kuò)張刺激外，其他情況同模型大鼠。大鼠成年后通過(guò)測(cè)量

7、腹外斜肌對(duì)結(jié)直腸擴(kuò)張引起的放電反應(yīng)來(lái)評(píng)估腸道痛覺(jué)的敏感性。采用離體腦片場(chǎng)電位的記錄方法，觀察慢性?xún)?nèi)臟痛大鼠海馬場(chǎng)電位LTP，并在離體海馬腦片ACSF灌流液中加入0.25～1.0mg/L Ro 25-6981或2.5～10mg/L genistein后，觀察不同濃度Ro 25-6981或genistein對(duì)慢性?xún)?nèi)臟痛大鼠海馬場(chǎng)電位LTP的影響；同時(shí)采用western blot方法觀察比較NR2B及Tyr-1472磷酸化NR2B在慢性?xún)?nèi)臟痛

8、大鼠海馬的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.慢性?xún)?nèi)臟痛大鼠海馬場(chǎng)電位LTP的變化
　　 慢性?xún)?nèi)臟痛大鼠海馬場(chǎng)電位LTP峰值及斜率與正常大鼠相比較均顯著增加。
　　 2.Ro 25-6981對(duì)慢性?xún)?nèi)臟痛大鼠海馬場(chǎng)電位LTP的影響
　　 慢性?xún)?nèi)臟痛大鼠離體海馬腦片ACSF灌流液中加入Ro 25-6981可劑量依賴(lài)性顯著降低海馬場(chǎng)電位LTP的峰值及斜率。
　　 3.Genistein對(duì)慢性?xún)?nèi)臟

9、痛大鼠海馬場(chǎng)電位LTP的影響
　　 慢性?xún)?nèi)臟痛大鼠離體海馬腦片ACSF灌流液中加入genistein可劑量依賴(lài)性顯著降低海馬場(chǎng)電位LTP的峰值及斜率；
　　 4.NR2B及Tyr-1472磷酸化NR2B在慢性?xún)?nèi)臟痛大鼠海馬中的表達(dá)情況
　　 通過(guò)western blot的方法觀察結(jié)果顯示，NR2B及Tyr-1472磷酸化NR2B在慢性?xún)?nèi)臟痛大鼠海馬的表達(dá)與正常大鼠相比較均顯著增加。
　　 結(jié)論：