肝移植受者外周血調節(jié)性T細胞變化及其臨床意義.pdf

1、目的：器官移植的最終目標是實現(xiàn)移植物耐受即在停用免疫抑制劑下維持移植物功能，但同時保留受者對外源性抗原的免疫應答。雖然目前臨床上還很難實現(xiàn)，但已有部分器官移植受者在停用免疫抑制劑后并未出現(xiàn)移植物排斥反應，特別是在肝移植受者中較常見。研究表明CD4+CD25+調節(jié)性T細胞(regulatory T cell，Treg)介導的免疫調節(jié)在誘導移植物免疫耐受中起重要作用。本研究檢測同種原位肝移植術后肝功能穩(wěn)定受者外周血CD4+CD25+FOXP

2、3+ Tregs水平變化，探討不同血藥濃度他克莫司(Tacrolimus，F(xiàn)K506)維持免疫治療對Tregs水平的影響，為臨床肝移植受者移植免疫監(jiān)測和合理應用免疫抑制劑提供依據(jù)。 方法：選擇37例行原位肝移植受者作為研究對象，所有受者接受FK506維持免疫治療且肝功能長期穩(wěn)定(>1年)，根據(jù)采血時的FK506血藥濃度分為低濃度組(FK506<6.0 ng/ml)30例和高濃度組(FK506≥6.0 ng/mL)7例；30例同齡

3、健康人群作為正常對照組。清晨空腹采靜脈血2ml，肝素抗凝，F(xiàn)icoll淋巴細胞分離液進行密度梯度離心，分離出外周血單個核細胞(PBMC)，熒光免疫抗體標記后流式細胞術檢測PBMC中CD4、CD25和FOXP3的表達水平，應用Cell quest軟件分析流式檢測結果。各群細胞占淋巴細胞比率從流式分析結果圖中直接讀取，細胞絕對數(shù)通過采血當天的血常規(guī)結果進行計算。比較各組之間CD4+CD25+和CD4+CD25+FOXP3+ Tregs絕對數(shù)

4、和比率差異，同時對肝移植受者Tregs水平與FK506血藥濃度進行Spearman秩相關分析。 結果：低濃度組受者外周血CD4+CD25+和CD4+CD25+FOXP3+ Tregs絕對數(shù)和占淋巴細胞比率較對照組減少但無明顯差異(P>0.05)，高濃度組則顯著低于對照組(P<0.01)和低濃度組(P<0.05)。兩組肝移植受者CD4+CD25+和CD4+CD25+FOXP3+ Treg細胞與CD4+T細胞的比率均與對照組無明顯差

5、異(P>0.05)。肝移植受者CD4+CD25+和CD4+FOXP3+占淋巴細胞比率與FK506血藥濃度呈顯著負相關([r=-0.479，P=0.003]和[r=-0.648，P<0.001])。在原發(fā)病為肝癌與非肝癌受者間Tregs水平無明顯差異(P>0.05)，F(xiàn)K506單用或FK506+霉酚酸酯(MMF)二聯(lián)免疫抑制治療方案間Tregs亦無明顯差異(P>0.05)。 結論：1、肝移植受者在FK506維持免疫治療下肝功能長期

6、穩(wěn)定時，外周血CD4+CD25+和CD4+CD25+FOXP3+ Treg細胞絕對數(shù)量和占淋巴細胞比率較正常正常人群降低。2、肝移植受者肝功能長期穩(wěn)定時，外周血CD4+CD25+和CD4+CD25+FOXP3+Treg水平與FK506血藥濃度有關，高血藥濃度受者Treg細胞數(shù)量和占淋巴細胞比率均顯著降低，低血藥濃度受者Treg水平雖有降低但無統(tǒng)計學差異。Treg細胞水平隨血藥濃度升高逐漸降低，兩者呈顯著負相關。3、肝移植受者肝功能長期穩(wěn)