ERK1-2通路在低氧刺激PASMCs引起的鈣激活氯通道表達改變中的作用研究.pdf

1、目的:
　　1.探討低氧狀態(tài)下大鼠肺動脈平滑肌細胞(PASMCs)中鈣激活性氯離子通道(CLCA2) mRNA和蛋白表達的變化。
　　2.探討低氧狀態(tài)下鈣激活性氯離子通道(CLCA2)與ERK1/2信號通路的關系。
　　方法:
　　1.解剖SD雄性大鼠，取出肺動脈平滑肌，采用酶消化法獲取PASMCs，進行細胞原代培養(yǎng)。
　　2.采用小鼠抗大鼠SMα-actin免疫熒光細胞化學法進行細胞鑒定。
　　3.

2、經(jīng)培養(yǎng)鑒定PASMCs隨機分為:常氧組（N組，n=6），低氧組（H組，n=6），DMSO對照+低氧組（D組，n=6），U0126干預+低氧組（U組，n=6），Staurosporineaglycone干預+低氧組(SA組，n=6)。
　　4.采用免疫印跡法檢測鈣激活性氯離子通道(CLCA2)蛋白的表達。
　　5.采用半定量逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)技術測定鈣激活性氯離子通道(CLCA2) mRNA水平的表達。

3、>　　結果:與常氧組（N組）比較，低氧組（H組）PASMCs中CLCA2 mRNA和蛋白的表達量均顯著上調，差異有統(tǒng)計學意義（均P＜0.01）;與DMSO對照+低氧組(D組)比較，U0126干預+低氧組（U組）CLCA2 mRNA和蛋白的表達均明顯上調，差異有統(tǒng)計學意義（均P＜0.01），Staurosporine aglycone干預+低氧組(SA組)mRNA的表達顯著下調，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，蛋白的表達輕微下調，差異無