乙醇改變骨髓間充質干細胞神經肽的表達.pdf

1、現(xiàn)如今,患有酒精性股骨頭壞死疾病的患者人群越來越多,嚴重困擾了人們的生活,但其致病的機理尚未清楚,而且到目前為止,還未找到任何一種能夠有效預防酒精性股骨頭壞死的方法。其嚴重影響了人們的身心健康,降低了生活質量。股骨頭缺血壞死是指股骨頭的血運不良最終導致骨細胞及組織的不斷死亡和修復,從而使股骨頭內部結構發(fā)生改變,而后塌陷,最終導致關節(jié)活動功能發(fā)生障礙。自17世紀有學者提出此病至今,許多學者先后提出了一系列學說,但還沒有能夠完整合理說明發(fā)病

2、機制的學說。骨髓間充質干細胞是一類能夠向成骨細胞方向以及其它細胞方向分化的干細胞,骨髓中存在一類神經肽類物質,這類物質對成骨或血管的分化有誘導作用,從而參與到骨組織細胞的代謝過程中,并發(fā)揮著重要的作用。到目前為止,乙醇對人骨髓間充質干細胞中神經肽表達影響,這方面在國內外還沒有報道。
　　 目的:
　　 利用體外細胞學實驗,觀察乙醇對人骨髓間充質干細胞降鈣素基因相關肽受體、P物質受體、過氧化物酶體增殖子活化受體γmRNA及

3、Runx2mRNA表達的影響,進一步探討酒精性股骨頭缺血壞死的發(fā)病機制。
　　 材料與方法:
　　 在招募的10名年齡平均在57.5(54-62)歲的健康志愿者中抽取骨髓標本,其中有6名男性志愿者,4名女性。
　　 利用密度梯度離心與貼壁分離相結合的方法分離純化細胞,使用無菌注射器抽取10 mL髂骨骨髓后,快速注入裝有肝素鈉的無菌管內并搖勻,取等體積的Ficoll淋巴細胞分離液,將標本緩慢鋪上,離心后中間的白膜層

4、則是BMSCs細胞層,輕輕將其抽出,加入PBS混勻,離心后棄去上清,加入培養(yǎng)基,分裝到細胞培養(yǎng)瓶中,在培養(yǎng)箱中培養(yǎng),第3 d后首次換液,根據(jù)培養(yǎng)液的顏色及細胞生長情況2d-3d換液,定期觀察細胞。利用胰酶消化傳代,免疫化學染色鑒定原代細胞。取6孔培養(yǎng)板若干,將2代細胞傳代接種到板上培養(yǎng),當孔內的細胞鋪滿板孔80％左右時,通過每4個樣本一組將細胞隨機分為實驗組與對照組。培養(yǎng)基加入乙醇維持濃度在0.09 mol/L為實驗組,正常培養(yǎng)的則是對

5、照組。通過Trizol法在使用乙醇干預的第11d提取RNA,并且檢驗RNA純度和完整性。逆轉錄合成cDNA,而后通過實時熒光定量PCR(RT-qPCR)檢測以及PCR產物瓊脂糖凝膠電泳,主要觀察實驗組與對照組細胞CGRP受體、P物質受體、PPAR-γ,、Runx2 mRNA表達。
　　 結果與結論:
　　 培養(yǎng)11d后,實驗組降鈣素基因相關肽受體、P物質受體、Runx2 mRNA表達較對照組明顯降低(P<0.01),過氧