Adrenomedullin-Intermedin對大鼠腎臟缺血再灌注損傷的保護作用及機制研究.pdf

1、目的：觀察腎上腺髓質素（AM）對大鼠腎臟缺血再灌注損傷（IRI）誘導腎小管上皮細胞凋亡的影響，并探討其機制。
　　 方法：
　　 1、Wistar大鼠隨機分為4組：假手術組、IRI組、轉空質粒組和轉AM 質粒組。大鼠右腎切除后1周，用超聲微泡造影劑介導的基因轉染方法將大鼠AM 真核表達質粒轉染大鼠腎臟，1周后采用免疫組織化學方法檢測轉染效率。轉染成功后夾閉左腎動脈45min制作腎臟IRI 模型，于再灌注24h后留取腎組織

2、標本。
　　 2、TUNEL 染色檢測腎組織細胞凋亡。
　　 3、RT-PCR 檢測腎組織Bcl-2、Bax和Fas的Mrna表達。
　　 4、Western免疫印跡法檢測caspase-3、caspase-8和caspase-9的蛋白質表達。
　　 結果：
　　 1、轉染效率：轉AM 質粒組的AM表達顯著高于轉空質粒組。
　　 2、與假手術組相比，IRI組腎組織凋亡細胞數明顯增加（p＜0

3、.05）；腎組織Bax、Bcl-2、Fas、caspase-3、caspase-8和caspase-9表達上調（p＜0.05），但Bax上調顯著，故Bax/Bcl-2升高（p＜0.05）。
　　 3、與IRI組相比，轉AM 質粒組腎組織凋亡細胞數明顯減少（p＜0.05）；Bax、Fas、caspase-3、caspase-8和caspase-9表達下調（p＜0.05），Bcl-2表達進一步上調（p＜0.05），故Bax/Bcl-

4、2降低（p＜0.05）。
　　 4、轉空質粒組和IRI組比較，上述各指標均無統計學差異（p＞0.05）。
　　 結論：AM能夠減輕腎臟IRI 誘導的腎小管上皮細胞凋亡，其機制至少部分是通過抑制caspase 依賴的內、外源性凋亡途徑實現的。
　　 第二部分:目的：以大鼠單腎缺血再灌注損傷（IRI）模型模擬體內腎臟IRI，通過轉染高表達intermedin（IMD）質粒，觀察IMD對腎臟IRI后血管生長相關因子HI

5、F-1a、VEGF和Tie-2表達的影響，探討IMD對腎臟IRI的修復作用。
　　 方法：
　　 1、模型制作：Wistar大鼠隨機分為4組：假手術組、IRI組、轉空質粒組、轉IMD質粒組。假手術組：切除大鼠右腎1周后，鈍性分離左腎動靜脈，不夾閉；IRI組：切除大鼠右腎1周后，夾閉左腎腎動脈45min；轉IMD 質粒組和轉空質粒組：大鼠右腎切除后1周，用超聲微泡造影劑介導的基因轉染方法將大鼠IMD 真核表達質粒∕空質粒轉

6、染大鼠腎臟，轉染成功后夾閉左腎動脈45min 制作腎臟IRI 模型。分別于再灌注1d、2 d、3d、4 d、7 d和14 d后留取腎組織標本。
　　 2、采用 RT-PCR 檢測HIF-1a、VEGF和Tie-2的mRNA表達。
　　 3、Western免疫印跡法檢測腎組織VEGF的蛋白質表達。
　　 4、ELISA 檢測HIF-1a和Tie-2的蛋白質表達。
　　 結果：
　　 1、與假手術組相

7、比，HIF-1a mRNA和蛋白質的表達均于再灌注后1d表達達到高峰，2d 持續(xù)高表達，3d表達開始明顯下降,4d、7d和14d 接近于假手術組；VEGF和Tie-2 mRNA和蛋白質表達均于再灌注后1d 開始增加，2d 達到高峰，3d 開始下降，4d、7d和14d 接近于假手術組（p＞0.05）；
　　 2、轉IMD 質粒組大鼠腎組織HIF-1a、VEGF和Tie-2 mRNA和蛋白質的表達于再灌注后1d、2d、3d和4d 顯