四硫代鉬酸銨抑制順鉑與人銅伴侶蛋白Atox1的相互作用.pdf

1、順鉑是臨床上廣泛使用的抗癌藥物。它通過與細胞核內DNA結合造成DNA損傷，誘導細胞凋亡。但是，只有少量的順鉑能進入細胞核并與DNA結合。越來越多的研究表明，一些與銅轉運相關的蛋白質可以與順鉑結合，導致進入細胞核內的順鉑減少。銅伴侶蛋白Atox1被認為與細胞內順鉑的轉運相關。最近晶體結構研究表明Atox1的CXXC(C為半胱氨酸)金屬結構域可以直接與順鉑結合;細胞內核磁共振結果也證實了在細胞內Atox1蛋白與順鉑的結合。因此，Atox1蛋

2、白被認為可以作為克服細胞對順鉑耐藥性的藥物作用靶點。
　　四硫代鉬酸銨([(NH4)2MoS4]，TM)是臨床上用于治療Wi1son病的銅螯合劑。TM能夠通過降低銅的含量抑制腫瘤周邊血管的產(chǎn)生，從而抑制腫瘤生長。它也可以與血清白蛋白、銅藍蛋白和金屬硫蛋白等多種銅蛋白結合，調節(jié)銅的含量。值得注意的是多項研究表明，TM可以通過選擇性的增加腫瘤組織中的DNA鉑化量來增強順鉑的癌癥治療效果;同時TM也可以減弱細胞對順鉑的耐藥性;但是，這種

3、協(xié)同作用的產(chǎn)生原因并不清楚。有研究提出TM和順鉑的協(xié)同作用可能是由于TM的銅螯合能力。最近，X射線晶體結構顯示TM可以與酵母銅伴侶蛋白Atx1結合，形成穩(wěn)定的[TM·Cu·(Cu-Atx1)3]復合物。有趣的的是，Atx1是人銅分子伴侶蛋白Atox1的類似物，而人銅伴侶蛋白Atox1被認為與順鉑的耐藥性有關?；谶@些發(fā)現(xiàn)，我們推測TM可能干擾Cu-Atox1與順鉑之間的相互作用，因此降低細胞對順鉑的耐藥性。
　　在本文中，我們研究

4、了TM對Cu-Atox1與順鉑反應的影響。結果證實了TM與溶液中的Cu-Atox1反應可以形成三聚體，并抑制Cu-Atox1的鉑化。此外，TM能夠抑制順鉑誘導的Cu-Atox1的解折疊和聚集。同時，我們也使用了apo-Atox1和Ag-Atox1作為Cu-Atox1的對照。有趣的是，TM在相同實驗條件下只能抑制Cu-Atox1的鉑化，而不能阻止apo-Atox1、Ag-Atox1與順鉑的反應。該結果表明以Cu-S-Mo為中心的三聚體復合

5、物的形成是TM抑制順鉑與Cu-Atox1反應，進而克服依賴Atox1蛋白的順鉑耐藥性的關鍵因素。這些結果有助于了解TM和順鉑在癌癥化療中的協(xié)同作用。
　　第一章首先對鉑類藥物的抗癌機理做了文獻綜述。然后，重點介紹了鉑類抗癌藥物與銅轉運蛋白的相互作用。主要包括銅攝取蛋白Ctr1、銅伴侶蛋白Atox1和銅泵出蛋白ATPae的結構和功能，以及它們在鉑轉移中發(fā)揮的重要作用。最后介紹了四硫代鉬酸銨單獨在藥物作用方面的研究現(xiàn)狀，以及四硫代鉬酸

6、銨與順鉑聯(lián)合給藥的相關研究。
　　第二章中，我們研究了TM對順鉑與Cu-Atox1反應的影響。色譜分析和電噴霧質譜證實了TM可以抑制順鉑與Cu-Atoxl的相互作用。二維核磁共振和圓二色譜實驗表明TM會抑制順鉑誘導的Cu-Atoxl的解折疊。聚丙烯酰胺凝膠電泳方法證實了TM可以抑制順鉑誘導的Cu-Atoxl的聚集。同時用apo-Atoxl（沒有結合銅的Atox1蛋白）與Ag-Atoxl（結合Ag的Atox1蛋白）作為對照，發(fā)現(xiàn)在相