DFMG調節(jié)TLR4信號通路對氧化損傷的內皮細胞誘導巨噬細胞活化和遷移的影響.pdf

1、第一部分 LPC損傷的HUVE-12細胞對MΦ增殖、遷移及形成泡沫細胞的影響
　　目的:
　　研究溶血磷脂酰膽堿(lyso-Phosphatidylcholine，LPC)能否損傷人臍靜脈內皮細胞系細胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells，HUVE-12)，對人單核細胞(human acute monocytic leukemia cellline，THP-1)源性巨噬細胞(macr

2、ophages，MΦ)增殖、遷移、形成泡沫細胞的影響。
　　方法:
　　1、用LPC誘導氧化損傷HUVE-12，制備氧化應激損傷內皮細胞模型;用Transwell制備氧化應激損傷的HUVE-12與THP-1源性MΦ共培養(yǎng)的模型。
　　2、用MTT法、劃痕實驗法、油紅O染色法和總膽固醇含量測定分別檢測損傷的HUVE-12對THP-1源性MΦ增殖、遷移形成泡沫細胞的影響，Western Blot檢測HUVE-12細胞TLR

3、4、Myd88、NF-kBp65蛋白的表達水平。
　　結果:
　　隨著LPC濃度增加，HUVE-12活性氧的產生、LDH的含量都增加，LPC損傷HUVE-12上調共培養(yǎng)系統(tǒng)中HUVE-12細胞TLR4、Myd88、NF-kBp65表達和共培養(yǎng)條件培養(yǎng)基IL-1β的含量，促進共培養(yǎng)系統(tǒng)中MΦ增殖、遷移、形成泡沫細胞。
　　第二部分 DFMG干預LPC損傷HUVE-12細胞對MΦ增殖、遷移及形成泡沫細胞的影響
　　目

4、的:
　　研究活性新化學實體，7-二氟甲氧基-5，4'-二甲氧基金雀異黃素（7-difluoromethoxy-5，4'-dimethoxygenistein，DFMG）是否抑制LPC氧化損傷HUVE-12細胞對THP-1源性MΦ增殖、遷移及形成泡沫細胞的促進作用。
　　方法:
　　用MTT法、劃痕實驗、油紅O染色法和總膽固醇含量測定檢測濃度梯度DFMG對LPC損傷HUVE-12誘導THP-1源性MΦ增殖、遷移、形成泡

5、沫細胞的影響，Western Blot檢測HUVE-12細胞TLR4、Myd88、NF-kBp65蛋白的表達水平。
　　結果:
　　DFMG降低共培養(yǎng)條件培養(yǎng)基的IL-1β含量以及下調共培養(yǎng)系統(tǒng)中HUVE-12細胞TLR4、Myd88、NF-kBp65蛋白表達，抑制共培養(yǎng)系統(tǒng)中THP-1源性MΦ增殖、遷移、形成泡沫細胞。
　　第三部分 DFMG調節(jié)TLR4信號通路對LPC損傷HUVE-12細胞誘導MΦ增殖、遷移及形成泡

6、沫細胞的影響
　　目的:
　　研究DFMG抑制氧化損傷的HUVE-12促進THP-1源性MΦ增殖、遷移、形成泡沫細胞的作用是否涉及調控HUVE-12細胞的TLR4信號通路。
　　方法:
　　用MTT法、劃痕實驗、油紅O染色法和總膽固醇含量測定檢測TLR4特異性拮抗劑(CLI-095)、TLR4特異性激動劑（Lipopolysaccharides，LPS）、白介素-1受體特異性拮抗劑（Interleukin-1 r

7、eceptor antagonist，IL-1Ra）和DFMG對LPC損傷HUVE-12誘導THP-1源性MΦ增殖、遷移、形成泡沫細胞，western blot檢測HUVE-12細胞TLR4、Myd88、NF-kBp65蛋白的表達水平。
　　結果:
　　CLI-095、IL-1Ra、DFMG均能降低共培養(yǎng)條件培養(yǎng)基的IL-1β含量和下調共培養(yǎng)系統(tǒng)中HUVE-12細胞TLR4、Myd88、NF-kBp65蛋白的表達，抑制共培養(yǎng)

8、系統(tǒng)中THP-1源性MΦ增殖、遷移、形成泡沫細胞。LPS增加共培養(yǎng)條件培養(yǎng)基的IL-1β含量和上調共培養(yǎng)系統(tǒng)中HUVE-12細胞TLR4、Myd88、NF-kBp65蛋白的表達，促進共培養(yǎng)系統(tǒng)中THP-1源性MΦ增殖、遷移、形成泡沫細胞。
　　結論:
　　1.在transwell共培養(yǎng)基系統(tǒng)中，LPC損傷HUVE-12促進MΦ增殖、遷移、形成泡沫細胞。
　　2.DFMG抑制LPC損傷HUVE-12促進MΦ增殖、遷移、形