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1、離子液體(Ionic Liquids,ILs)由于不會(huì)產(chǎn)生大氣污染物或可吸入性有毒物質(zhì)而被認(rèn)為是一種環(huán)境友好型溶劑。近年來,由于其生產(chǎn)與應(yīng)用的快速增長(zhǎng),加之其在水中的高溶解性和難生物降解性,導(dǎo)致其在水環(huán)境中可長(zhǎng)期存在進(jìn)而對(duì)水生生物造成危害,因此,其“綠色溶劑”的稱號(hào)也逐漸受到質(zhì)疑。迄今為止,已有許多關(guān)于離子液體對(duì)水生生物(細(xì)菌、藻類、無脊椎動(dòng)物、脊椎動(dòng)物等)的毒性研究報(bào)告。大致來說,離子液體的毒性與其自身的結(jié)構(gòu)有關(guān),包括烷基鏈長(zhǎng)度、陽(yáng)離
2、子類型與陰離子類型。本論文研究了四種具有不同陰、陽(yáng)離子的離子液體對(duì)斜生柵藻(Scenedesmus ob liquus)的影響,四種離子液體分別是:1-己基3-甲基咪唑氯鹽([HMIM]Cl),1-己基3-甲基咪唑硝酸鹽([HMIM]NO3),氯化N-己基-3-甲基吡啶([HMPy]Cl),溴化N-己基-3-甲基吡啶([HMPy]Br),研究?jī)?nèi)容主要包括以下四個(gè)部分:
通過研究四種離子液體對(duì)斜生柵藻的急性毒性,可以發(fā)現(xiàn):在一定
3、的暴露時(shí)間下,ILs對(duì)斜生柵藻的生長(zhǎng)抑制率隨濃度的增大而增大,呈明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系;當(dāng)用低濃度的ILs處理斜生柵藻時(shí),可觀察到隨著暴露時(shí)間的延長(zhǎng),ILs對(duì)藻的生長(zhǎng)抑制率有減小的趨勢(shì),藻的生物量可逐漸恢復(fù)到接近對(duì)照組水平,這說明在較低濃度ILs處理下,隨著暴露時(shí)間的延長(zhǎng),斜生柵藻有一定恢復(fù)生長(zhǎng)的能力;相反地,在高濃度的ILs處理下,ILs對(duì)斜生柵藻的生長(zhǎng)抑制率隨著暴露時(shí)間的延長(zhǎng)而增大,說明高濃度ILs對(duì)斜生柵藻生長(zhǎng)的影響較大,具有不可逆
4、性。四種ILs對(duì)斜生柵藻的IC50值均隨著暴露時(shí)間的延長(zhǎng)先減小后增大,說明四種ILs對(duì)斜生柵藻的毒性隨著暴露時(shí)間的延長(zhǎng)先增大后減小,分別在48 h和72 h時(shí)毒性達(dá)到最強(qiáng);對(duì)比四種ILs對(duì)斜生柵藻的IC50值時(shí)發(fā)現(xiàn),毒性順序?yàn)?[HMIM]NO3>[HMIM]Cl>[HMPy]Br>[HMPy]Cl。根據(jù)Passino對(duì)離子液體毒性的分級(jí),四種離子液體的毒性均屬于中等毒性。
通過測(cè)定暴露48、96和144h后,ILs對(duì)斜生柵藻
5、光合作用影響,可以得出:四種ILs對(duì)斜生柵藻葉綠素產(chǎn)生均有較強(qiáng)的抑制作用,藻細(xì)胞內(nèi)葉綠素a、葉綠素b及總?cè)~綠素含量均隨著ILs濃度的增加而減小,呈明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系;相同濃度ILs處理下,抑制程度會(huì)隨著暴露時(shí)間的延長(zhǎng)而有所緩和;且在相同的處理濃度下,咪唑類ILs對(duì)葉綠素含量的抑制程度大于吡啶類ILs,毒性大小:[HMIM]NO3>[HMIM]Cl>[HMPy]Br>[HMPy]Cl。此外,在對(duì)斜生柵藻的熒光參數(shù)F0、Fv/Fm和Fv/
6、F0和快速光響應(yīng)曲線(Y(Ⅱ)、NPQ)的分析中可以發(fā)現(xiàn):四種ILs均對(duì)斜生柵藻光合系統(tǒng)產(chǎn)生了影響,ILs對(duì)斜生柵藻光合系統(tǒng)的損傷程度會(huì)隨著濃度的升高而加重;隨著暴露時(shí)間的延長(zhǎng),ILs處理下的斜生柵藻光合系統(tǒng)會(huì)略有恢復(fù);咪唑類ILs對(duì)斜生柵藻光合系統(tǒng)的影響程度大于吡啶類ILs,毒性大小為:[HMIM]NO3>[HMIM]Cl>[HMPy]Br>[HMPy]Cl。
暴露于四種ILs24、48、72和96 h后,對(duì)斜生柵藻細(xì)胞膜通
7、透性產(chǎn)生了影響:暴露于四種ILs相同時(shí)間的情況下,藻細(xì)胞膜通透性均隨ILs濃度的升高而增大,呈明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系;咪唑類離子液體處理組細(xì)胞膜通透性大于吡啶類離子液體,毒性大小順序?yàn)?[HMIM]NO3>[HMIM]Cl>[HMPy]Br>[HMPy]Cl;當(dāng)暴露于較高濃度的ILs環(huán)境下時(shí),ILs對(duì)藻細(xì)胞膜通透性的影響程度隨時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸加重。另外,通過觀察藻細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)圖可發(fā)現(xiàn),ILs的存在會(huì)改變細(xì)胞形態(tài)與大小,同時(shí)破壞細(xì)胞壁、細(xì)胞
8、膜與細(xì)胞器;而且在ILs環(huán)境下,藻細(xì)胞的自我保護(hù)機(jī)制會(huì)使得細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)大量黑色電子致密顆粒和淀粉粒。
進(jìn)一步研究表明,在不同暴露時(shí)長(zhǎng)下,各濃度ILs處理下均會(huì)刺激斜生柵藻細(xì)胞內(nèi)ROS含量上升,且藻細(xì)胞內(nèi)ROS含量均隨著ILs處理濃度的升高而增大,呈明顯的正相關(guān)關(guān)系;暴露于ILs144h后,咪唑類ILs處理的藻細(xì)胞內(nèi)的ROS含量明顯高于吡啶類ILs,毒性大小:[HMIM]NO3>[HMIM]Cl>[HMPy]Br>[HMPy]Cl
9、。通過觀察斜生柵藻內(nèi)ROS水平的激光共聚焦圖,可以看到藻細(xì)胞內(nèi)的綠色熒光含量均隨著ILs濃度的升高而增多,在高濃度Ls處理下,細(xì)胞內(nèi)ROS的分布比較廣泛,綠色熒光幾乎覆蓋整個(gè)藻細(xì)胞,說明ILs可使細(xì)胞產(chǎn)生大量ROS。在不同的暴露時(shí)間下,較低濃度的ILs處理對(duì)藻細(xì)胞體內(nèi)可溶性蛋白有促進(jìn)作用,隨著ILs濃度的升高,可溶性蛋白含量呈下降趨勢(shì)。因此,在低濃度的ILs脅迫下,藻細(xì)胞為了維持自身正常的生理代謝,體內(nèi)可溶性蛋白含量增加,但當(dāng)ILs濃度
10、持續(xù)上升時(shí),其毒性超出藻細(xì)胞耐受范圍,造成細(xì)胞損傷,體內(nèi)可溶性蛋白含量下降。在不同暴露時(shí)長(zhǎng)下,藻細(xì)胞內(nèi)SOD和CAT活性隨濃度的升高呈明顯的先上升后下降的趨勢(shì),說明斜生柵藻受到氧化脅迫,抗氧化酶(SOD和CAT)活性升高以減輕ROS造成的損傷,但隨著ILs濃度的升高或暴露時(shí)間的延長(zhǎng),ROS含量最終會(huì)超出抗氧化酶的調(diào)節(jié)水平,導(dǎo)致ROS在細(xì)胞內(nèi)的不斷積累,最終造成細(xì)胞的損傷或死亡。離子液體對(duì)斜生柵藻的毒性機(jī)制可能是由于導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生過量的R
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