健胃補(bǔ)脾湯抗小鼠乙醇性胃黏膜損傷作用的研究.pdf

1、目的：
　　本課題通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，觀察方劑健胃補(bǔ)脾湯對(duì)乙醇性小鼠胃黏膜損傷保護(hù)作用及相關(guān)作用機(jī)制，探究健胃補(bǔ)脾湯發(fā)揮保護(hù)作用的可能機(jī)制，為健胃補(bǔ)脾湯對(duì)乙醇性胃黏膜損傷保護(hù)作用的分子機(jī)制提供直接的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，并且為乙醇性胃黏膜損傷性胃潰瘍（GU）的預(yù)防與治療提供新的藥物防治思路，為臨床治療乙醇性胃黏膜損傷類疾病提供指導(dǎo)和客觀依據(jù)。
　　方法：
　　1、清潔級(jí)（Ⅱ級(jí)）健康小白鼠96只，體重25-30g不等，雌雄各半，由浙江中醫(yī)

2、藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心提供。將其稱重后編號(hào)，隨機(jī)分成6組，每組雌雄各半，分別為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組(給予灌胃對(duì)胃黏膜損傷有保護(hù)作用的西咪替丁)、保護(hù)組（包括中藥低劑量組、中藥中劑量組和中藥高劑量組三組），每組小鼠均為16只。
　　2、建立小鼠乙醇性胃黏膜損傷模型。正常對(duì)照組給予動(dòng)物生理鹽水灌胃7天，劑量8ml/kg鼠重；模型對(duì)照組首先給予動(dòng)物生理鹽水灌胃兩天，劑量8ml/kg鼠重，于第三天開始灌胃55％的乙醇，每天給藥一次，

3、8ml/kg鼠重，連續(xù)5天；陽(yáng)性對(duì)照組給予Cim7mg/Kg，其劑量由臨床常用劑量折算得來(lái)。該劑量為大量文獻(xiàn)常用劑量，已獲得認(rèn)可劑量。中藥保護(hù)組：分別給予小鼠低、中、高劑量（3ml/kg，6ml/kg，9ml/kg）的健胃補(bǔ)脾湯灌胃7天，于第3天灌胃健胃補(bǔ)脾湯預(yù)保護(hù)后2h開始灌胃55%乙醇，每天給藥一次，連續(xù)5天。上述各組按照描述給藥方法連續(xù)給藥7d，每日一次。在第六天灌胃結(jié)束后，立即實(shí)施禁食不禁水24h。處死，從病理形態(tài)學(xué)進(jìn)一步觀察健

4、胃補(bǔ)脾湯對(duì)乙醇致小鼠胃黏膜損傷的保護(hù)作用，并檢測(cè)各組小鼠血清中一氧化氮（NO）、血漿前列腺素E2（PGE2）以及Ⅱ相酶中醌還原酶（quninone reductase,QR）的含量，探討健胃補(bǔ)脾湯防治小鼠乙醇性胃黏膜損傷的相關(guān)分子機(jī)制。
　　3、應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)小鼠胃黏膜組織中誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）的平均光密度值的變化，根據(jù)其數(shù)值的變化，來(lái)探討健胃補(bǔ)脾湯發(fā)揮作用的調(diào)控機(jī)制。
　　4、進(jìn)行Pearson相關(guān)性分析，分

5、析健胃補(bǔ)脾湯與小鼠血清NO、PGE2、QR濃度及胃黏膜iNOS平均光密度值變化的相關(guān)性。
　　結(jié)果：
　　1、根據(jù)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)所得損傷率及損傷抑制率，可得出陽(yáng)性對(duì)照組以及各中藥治療組均能顯著抑制小鼠乙醇性胃黏膜損傷的發(fā)生，中藥中劑量組與中藥高劑量組對(duì)乙醇性胃黏膜損傷的抑制作用均明顯強(qiáng)于陽(yáng)性對(duì)照組（p＜0.05），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2、通過(guò)對(duì)健胃補(bǔ)脾湯對(duì)小鼠血清中NO含量變化的分析，可得知血清NO含量，模型對(duì)照組與中藥低

6、劑量治療組血清中NO含量明顯低于正常對(duì)照組，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05）；中藥低劑量組血清NO含量雖然高于模型對(duì)照組，但是不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＞0.05）；正常對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、中藥中、高劑量組血清NO含量比模型對(duì)照組要高，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05）；與陽(yáng)性對(duì)照組相比，中藥中、高劑量組血清 NO含量升高，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05）。說(shuō)明中、高劑量的健胃補(bǔ)脾湯能使NO含量升高，從而起到對(duì)乙醇性胃黏膜損傷的保護(hù)作用。

7、>　　3、通過(guò)對(duì)健胃補(bǔ)脾湯對(duì)小鼠血清中PGE2含量變化的分析，可得知血清PGE2含量，模型對(duì)照組與中藥低劑量治療組血清中PGE2含量明顯低于正常對(duì)照組，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05）；中藥低劑量組血清PGE2含量雖然高于模型對(duì)照組，但是不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＞0.05）；正常對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、中藥中、高劑量組血清PGE2含量比模型對(duì)照組要高，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05）；與陽(yáng)性對(duì)照組相比，中藥中、高劑量組血清PGE2含量升高，且具

8、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05）。說(shuō)明中、高劑量的健胃補(bǔ)脾湯能使PGE2含量升高，從而起到對(duì)乙醇性胃黏膜損傷的保護(hù)作用。
　　4、通過(guò)對(duì)健胃補(bǔ)脾湯對(duì)小鼠血清中QR含量變化的分析，可得知血清QR含量，模型對(duì)照組與中藥低劑量治療組血清中QR含量明顯低于正常對(duì)照組，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05）；中藥低劑量組血清QR含量雖然高于模型對(duì)照組，但是不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＞0.05）；正常對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、中藥中、高劑量組血清QR含量比模型對(duì)照

9、組要高，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05）；與陽(yáng)性對(duì)照組相比，中藥中、高劑量組血清QR含量升高，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05）。說(shuō)明中、高劑量的健胃補(bǔ)脾湯能使QR含量升高，從而起到對(duì)乙醇性胃黏膜損傷的保護(hù)作用。
　　5、本實(shí)驗(yàn)中所得數(shù)據(jù)顯示，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組與各中藥劑量組小鼠胃黏膜組織中（iNOS）平均光密度值均有不同程度升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05）；與陽(yáng)性對(duì)照組相比，中藥中高劑量組的（iNOS)平均光密度值

10、均有不同程度升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05）；中藥低劑量組iNOS平均光密度值雖高于模型對(duì)照組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＞0.05）；中藥中劑量組與高劑量組iNOS平均光密度值均高于模型對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05）。說(shuō)明中、高劑量的健胃補(bǔ)脾湯對(duì)于胃黏膜iNOS的表達(dá)有促進(jìn)作用，從而對(duì)胃黏膜損傷起到保護(hù)作用。
　　6、本研究通過(guò)進(jìn)行Pearson相關(guān)性分析，得出健胃補(bǔ)脾湯濃度與血清NO、PGE2、QR濃度及胃黏膜iNO

11、S平均光密度值的變化存在相關(guān)性，且成正相關(guān)；具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05），提示健胃補(bǔ)脾湯具有保護(hù)乙醇性胃黏膜損傷的作用。
　　結(jié)論:
　　1、通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，得出上述結(jié)果，提示健胃補(bǔ)脾湯在一定程度上能夠防治乙醇對(duì)小鼠胃黏膜的損傷，是防治小鼠乙醇性胃黏膜損傷的有效藥物。
　　2、健胃補(bǔ)脾湯對(duì)小鼠乙醇性胃黏膜損傷的保護(hù)作用可能是通過(guò)增加小鼠血清中NO、PGE2、QR及胃黏膜中iNOS的含量來(lái)實(shí)現(xiàn)的，從而使胃黏膜血管舒張，增