人類新基因ARHGAP12的功能研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、該實驗室從人胎腦cDNA文庫中分離到一條新的rhlGAP基因,它具有兩種剪接形式.生物信息學分析發(fā)現(xiàn)它有20個外顯子,位于10p12.它的蛋白產(chǎn)物有5個結構域:SH、WW、WW、PH和rhoGAP.命名規(guī)則它被命名為ARHGAP12.在生物信息學分析的基礎上,我們對該基因進行了以下的實驗研究.①表達譜分析.通過PCR和Northern雜交,我們分析了它在正常組織和腫瘤細胞中的表達譜,發(fā)現(xiàn)它是廣譜表達的;②胞內(nèi)過表達分析.該基因的編碼區(qū)被

2、轉(zhuǎn)染入HO8910細胞以觀察可能的對宿主細胞在形態(tài)和增殖能力上的影響,結果表明它在胞內(nèi)過表達可刺激宿主細胞的增殖能力;③綠熒光蛋白定位.用該方法我們檢測了該基因產(chǎn)物在細胞內(nèi)的定位,發(fā)現(xiàn)細胞在靜息狀態(tài)下它主要分布于細胞質(zhì)中;④GAP活性分析.為測定該基因的RhoGAP結構域的活性,我們將其原核表達并進行了體外GAP活性分析實驗,結果排除了該結構域?qū)hoA,Racl和Cdc42Hs的GAP活性;⑤體外親和層析法結合實驗.原核表達了該基因的

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