兩種不同來源的苯二羥基苯甲酸脫羧酶的結構生物學研究.pdf

1、隨著工業(yè)發(fā)展的進程，煤與石油等非再生能源的不斷消耗，廢氣中的二氧化碳造成的環(huán)境影響也越來越大，其處理方法受到各國的關注。在生物科學的迅速發(fā)展中，有研究發(fā)現(xiàn)某些生物具有固定二氧化碳的生化反應，探究如何在溫和的條件下對二氧化碳進行生物固定則成為了研究熱點。常溫下，不需要添加任何輔助因子以及ATP，芳香羧酸脫羧酶（主要催化苯酚類衍生物）就能夠轉化芳香類羧酸成為芳香烴與二氧化碳，同時這個反應也是可逆的。
　　為了推進生物法在固定二氧化碳中

2、的應用，本文針對兩種不同來源的苯甲酸脫羧酶進行了結構生物學研究。本文工作根據前人從數(shù)據庫挖掘基因所獲得的芳香羧酸脫羧酶基因，設計引物，成功構建克隆pET-22b-AoDHBD(Aspergillus oryzae米曲霉菌，二羥基苯甲酸脫羧酶)與pET-22b-TmSAD（Trichosporon moniliiforme毛孢子菌屬，水楊酸脫羧酶），導入Rosetta(DE3)大腸桿菌中進行表達純化，并獲取大量蛋白。在結晶實驗中分別獲得了

3、7個不同的結晶條件，通過重復優(yōu)化池液組分，在上海光源BL17U1和BL19U1線站分別獲得了衍射分辨率達到1.76(A)與2.04(A)的晶體數(shù)據，從而解析了AoDHBD與TmSAD的晶體結構。
　　在獲得了二者的結構后，開展了其與底物復合物的結構研究。由于AoDHBD需要通過Zn2+結合底物從而進行反應，在誘導與純化時補加Zn2+，初步篩選得到8個可結晶條件，重復優(yōu)化后獲得了高質量的晶體，同時通過浸泡小分子的方法嘗試解析蛋白與底